[發明專利]一種酶解修飾的銅藻多糖及其應用

有效

• 申請號: 201510092196.6
• 申請日: 2015-02-18
• 公開（公告）號: CN104673859B
• 公開（公告）日: 2018-10-16
• 發明（設計）人: 邵平;邵佳美;陳曉曉;孫培龍
• 申請（專利權）人: 浙江工業大學
• 主分類號: C12P19/14
• 分類號: C12P19/14;C12P19/04
• 代理公司: 杭州天正專利事務所有限公司 33201
• 代理人: 黃美娟;俞慧

1.一種酶解修飾的銅藻多糖，其制備方法包括：

(1)銅藻多糖微波提取：銅藻粉末用95％乙醇進行微波提取，95％乙醇的加入體積以銅藻粉末的質量計為10～20mL/g，微波處理條件為：微波功率400～600W，溫度為50～90℃，微波時間為10～30min，提取結束后經冷凍離心分離得到多糖粗提液；

(2)分級醇沉：取多糖粗提液，在最終乙醇體積分數為30～40％的條件下進行沉淀操作，冷凍離心得到沉淀a和上清液a；

取上清液a在最終乙醇體積分數為55～65％的條件下進行沉淀操作，沉淀完全后經冷凍離心得到沉淀b和上清液b，沉淀b經水溶、蒸發、冷凍干燥得到SHP60粗多糖組分；

(3)SHP60粗多糖組分經大孔樹脂脫色、Sevage試劑脫蛋白得到SHPA多糖；

(4)在pH4.5～5.5的HAc-NaAc緩沖液體系中，SHPA多糖和葡聚糖酶于45～55℃進行酶解反應0.5～4h，終止反應后酶解反應液采用孔徑大小為500Da規格的透析袋進行流水透析，透析液經濃縮、冷凍干燥得到酶解產物；其中，SHPA多糖與葡聚糖酶的投料質量比為1：0.5～2，所述葡聚糖酶在所述緩沖液體系中的質量濃度為0.3-0.4％；

(5)酶解產物配成水溶液用0.45μm微濾膜過濾，所得濾液用DEAE-Sepharose FastFlow離子柱層析系統進行離子柱層析，上樣流速為1～2mL/min，分別以蒸餾水、0.1～0.4mol/L NaCl水溶液進行洗脫，洗脫流速為2～4mL/min，選定最大洗脫峰對應的洗脫液，濃縮、用0.45μm微濾膜過濾得到濾液；

(6)步驟(5)所得濾液用Sephadex G-25凝膠層析系統進行凝膠柱層析，上樣流速為1～3mL/min，以蒸餾水進行洗脫，洗脫流速為2～4mL/min，以硝酸銀指示劑檢測洗脫液中是否脫鹽完全并收集不含鹽的多糖部分，濃縮，冷凍干燥得到酶解修飾的銅藻多糖。

2.如權利要求1所述的酶解修飾的銅藻多糖，其特征在于：所述步驟(2)中，取多糖粗提液，在最終乙醇體積分數為30％的條件下進行沉淀操作，得到冷凍離心得到沉淀a和上清液a；取上清液a，在最終乙醇體積分數為60％的條件下進行沉淀操作，沉淀完全后經冷凍離心得到沉淀b和上清液b。

3.如權利要求1所述的酶解修飾的銅藻多糖，其特征在于：所述大孔樹脂使用大孔樹脂1180、DM130、或SD300。

4.如權利要求1所述的酶解修飾的銅藻多糖，其特征在于：所述步驟(4)中，酶解時間為1～3小時。

5.如權利要求4所述的酶解修飾的銅藻多糖，其特征在于：所述步驟(4)中，酶解時間為2小時。

6.如權利要求1所述的酶解修飾的銅藻多糖在制備抗氧化劑、或吸濕劑、或保濕劑中的應用。