[發明專利]改進的同型半胱氨酸檢測試劑及方法

有效

• 申請號: 201510091414.4
• 申請日: 2015-02-28
• 公開（公告）號: CN104630324B
• 公開（公告）日: 2016-11-09
• 發明（設計）人: 不公告發明人
• 申請（專利權）人: 北京愛必信生物技術有限公司
• 主分類號: C12Q1/48
• 分類號: C12Q1/48;C12Q1/34;C12Q1/32
• 代理公司: 北京律智知識產權代理有限公司 11438
• 代理人: 劉春生;于寶慶

1.一種檢測樣品中同型半胱氨酸含量的檢測試劑，其由試劑1和試劑2組成，其中試劑1包含下述成分：還原劑，S腺苷甲硫氨酸，pH?8.0～10.0的緩沖液1，EDTA二鈉鹽，檢測氨的試劑一部分，乳酸脫氫酶，試劑2包含下述成分：同型半胱氨酸甲基轉移酶，腺苷同型半胱氨酸酶，腺苷脫氨酶(ADA)，穩定劑，pH?7.5～8.5的緩沖液2，硫酸鎂，檢測氨的試劑的剩余部分。

2.根據權利要求1所述的檢測樣品中同型半胱氨酸含量的檢測試劑，其中同型半胱氨酸甲基轉移酶的用量為0.5～80KU/L，優選地，1-60KU/L，更優選地，5-40KU/L，更優選地，10-30KU/L，最優選地，20KU/L，和/或腺苷同型半胱氨酸酶的用量為0.5～50KU/L，優選地，1-40KU/L，更優選地，10-30KU/L，最優選地，20KU/L，和/或ADA的用量為0.1～150KU/L，優選地，0.5～100KU/L，更優選地，1～50KU/L，更優選地，2～20KU/L，最優選地，5KU/L，和/或乳酸脫氫酶的用量為0.5～20KU/L，優選地，1～10KU/L，更優選地，1～5KU/L，最優選地，2KU/L，并且其中，腺苷同型半胱氨酸酶的用量大于同型半胱氨酸甲基轉移酶的用量，且ADA的用量相對于反應體系是過量的。

3.根據權利要求1或2所述的檢測樣品中同型半胱氨酸含量的檢測試劑，其中S腺苷甲硫氨酸為商業可獲得的產品或利用ATP、蛋氨酸、蛋氨酸轉腺苷酶的循環酶反應生成，其中ATP和蛋氨酸位于試劑1，蛋氨酸轉腺苷酶位于試劑2；優選地，ATP的濃度為0.5mM～80mM，更優選地，1～60mM，更優選地，5-30mM，更優選地，8-15mM，最優選地，10mM；優選地，蛋氨酸的濃度為0.5～80mM，更優選地，1～40mM，更優選地，2-20mM，更優選地，3-10mM，最優選地，5mM；優選地，蛋氨酸轉腺苷酶的用量為0.1～100KU/L，更優選地，1～50KU/L，更優選地，2～30KU/L，更優選地，3～10KU/L，最優選地，5KU/L，并且其中，ATP大于蛋氨酸的量，優選地，蛋氨酸轉腺苷酶的用量大于同型半胱氨酸甲基轉移酶的用量。

4.根據權利要求1-3任一項所述的檢測樣品中同型半胱氨酸含量的檢測試劑，其中還原劑是含硫還原劑或三-(羧乙基)磷化氫鹽酸鹽(TCEP)，優選地，含硫還原劑為二硫蘇糖醇(DTT)或巰基乙醇，優選地，DTT的濃度為1.0～9mM，更優選地，1.2～7mM，更優選地，1.5～3mM，最優選地，1.5mM。

5.根據權利要求1-4任一項所述的檢測樣品中同型半胱氨酸含量的檢測試劑，其中，試劑1中檢測氨的試劑一部分為還原型輔酶和α-酮戊二酸，優選地，還原型輔酶選自NADH、NADPH、thio-NADH、thio-NADPH，更優選地，還原型輔酶為NADH，試劑2中檢測氨的試劑的剩余部分為谷氨酸脫氫酶，優選地，還原型輔酶的濃度為0.3～0.6mM，更優選地，0.4～0.5mM，最優選地，0.4mM；優選地，α-酮戊二酸的濃度為l～20mM，優選地，2～15mM，更優選地，5～10mM，最優選地，8mM；優選地，谷氨酸脫氫酶的用量為l～50KU/L，優選地，5-40KU/L，更優選地，10-30KU/L，最優選地，25KU/L。

6.根據權利要求1-5任一項所述的檢測樣品中同型半胱氨酸含量的檢測試劑，其中，試劑2的穩定劑選自非離子型表面活性劑物質、醇類物質、糖類物質、鹽類物質、氨基酸和蛋白質類物質，優選地，試劑2的穩定劑選自甘油、海藻糖、甘露醇、BSA，更優選地，試劑2的穩定劑是甘油，優選地，甘油的濃度為25％～45％，更優選地，28％～35％，最優選地，30％。

7.根據權利要求1-6任一項所述的檢測樣品中同型半胱氨酸含量的檢測試劑，其中，緩沖液1和緩沖液2獨立地選自Tris緩沖液、PBS緩沖液、碳酸鹽緩沖液，優選地，緩沖液1和緩沖液2的濃度為5～500mM，優選地，10～200mM，更優選地，20～100mM，更優選地，30～80mM；優選地，緩沖液1和緩沖液2均為50mM的Tris緩沖液且其中緩沖液1的pH為9.0，緩沖液2的pH為8.0。