[發明專利]一種檢測腫瘤標志物DKK1 濃度的酶聯免疫試劑盒

在審

• 申請號: 201510090581.7
• 申請日: 2015-02-28
• 公開（公告）號: CN105588941A
• 公開（公告）日: 2016-05-18
• 發明（設計）人: 王鋒;高鵬;吳丹;沈秋瑾;覃文新
• 申請（專利權）人: 蘇州飛康生物醫藥有限公司
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種檢測腫瘤標志物DKK1濃度的酶聯免疫試劑盒，其特征在于， 由包被有DKK1單克隆抗體1的多孔板、酶標記的DKK1單克隆抗體2、顯 色底物和底物終止液組成；其中，DKK1單克隆抗體1為10C3；DKK1單克 隆抗體2為6E8。

2.根據權利要求1所述的一種檢測腫瘤標志物DKK1濃度的酶聯免疫 試劑盒，其特征在于，所述酶標記的DKK1單克隆抗體2的保護液由pH＝7.2 的10mM磷酸鹽緩沖液、0.5％的牛血清白蛋白、0.01％的硫柳汞和50％甘 油組成。

3.根據權利要求2所述的一種檢測腫瘤標志物DKK1濃度的酶聯免疫 試劑盒，其特征在于，所述酶標記的DKK1單克隆抗體2的存貯條件為-20 ℃，且濃度大于100ug/ml。

4.根據權利要求3所述的一種檢測腫瘤標志物DKK1濃度的酶聯免疫 試劑盒，其特征在于，所述酶標記的DKK1單克隆抗體2的工作濃度稀釋倍 數為1:500-1:2500。

5.根據權利要求1至4任一項所述的一種檢測腫瘤標志物DKK1濃度 的酶聯免疫試劑盒的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：①制備包被 有DKK1單克隆抗體1的多孔板：用pH＝7-8的磷酸緩沖液將DKK1單克隆抗 體1稀釋后加入到多孔板的孔中，37℃孵育2小時進行包被；包被后用磷 酸鹽緩沖液洗板拍干；用5％牛血清白蛋白溶液37℃封閉1小時；封閉后用 磷酸鹽緩沖液洗板拍干，將其保存于4℃；②制備酶標記的DKK1單克隆抗 體2：用高碘酸鈉NaIO₄將酶表面的糖分子氧化成醛基；醛化后的酶再與 DKK1單克隆抗體2上的氨基相反應，形成Schiff堿；并進一步用NaBH₄還原生成穩定的酶標記檢測單克隆抗體；酶標后的抗體通過硫酸銨沉淀進 行純化，最后對保護液進行低溫透析以便長期貯存待用。