[發明專利]一種構建茶樹DNA指紋圖譜的方法

有效

• 申請號: 201510089500.1
• 申請日: 2015-02-27
• 公開（公告）號: CN104651515A
• 公開（公告）日: 2015-05-27
• 發明（設計）人: 孫威江;林志坤;陳志丹
• 申請（專利權）人: 福建農林大學
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 福州元創專利商標代理有限公司 35100
• 代理人: 蔡學俊

1.一種構建茶樹DNA指紋圖譜的方法，其特征在于：采用ISSR分子標記技術和二維碼技術構建茶樹DNA指紋圖譜，將指紋圖譜信息通過二維碼技術處理，轉化成二維碼圖形。

2.根據權利要求1所述的構建茶樹DNA指紋圖譜的方法，其特征在于：所述方法具體實施如下：

采用改良CTAB法提取供試茶樹品種的總DNA，通過瓊脂糖凝膠電泳檢測其濃度和純度，并將DNA樣本稀釋至100?ng/uL，利用優化后的ISSR反應體系和篩選的引物對茶樹DNA樣本進行PCR擴增，將擴增產物進行瓊脂糖凝膠電泳，分離ISSR分子標記，拍攝電泳圖片；根據ISSR圖譜條帶的有無，對PCR擴增產物進行統計分析，將電泳圖譜轉換成“0-1”形式的原始字符串，利用二維碼技術處理原始字符串，將原始字符串轉化成為二維碼圖形。

3.根據權利要求2所述的構建茶樹DNA指紋圖譜的方法，其特征在于：所述對PCR擴增產物進行統計分析，是根據ISSR圖譜條帶的有無，利用人工方法統計讀帶，將電泳圖上穩定出現的條帶，無論強弱均賦值為“1”，同一位置無條帶賦值為“0”，?輸入讀帶數據，建立原始字符串。

4.根據權利要求2所述的構建茶樹DNA指紋圖譜的方法，其特征在于：優化后的ISSR反應體系為：在20μL體系中，Ex-Buffer用1×Ex-Buffer，1U/μL?Ex-Taq酶，0.2mM/μL?dNTPs，0.5mM/μL?ISSR引物，2ng/μL?DNA模板。

5.根據權利要求2所述的構建茶樹DNA指紋圖譜的方法，其特征在于：篩選的引物如SEQ?ID?NO.1-12所示。