[發明專利]利用靈芝蛋白制備的抗氧化多肽及其制備方法

有效

• 申請號: 201510087701.8
• 申請日: 2015-02-26
• 公開（公告）號: CN104610430B
• 公開（公告）日: 2018-02-27
• 發明（設計）人: 汪少蕓;鄭惠華;邵彪;陳惠;陳瑩瑩;吳偉杰;田貞樂;湯利兵
• 申請（專利權）人: 江蘇安惠生物科技有限公司
• 主分類號: C07K7/06
• 分類號: C07K7/06;C12P21/06;C07K1/36;C07K1/34;C07K1/18;C07K1/20
• 代理公司: 南通市永通專利事務所(普通合伙)32100
• 代理人: 葛雷

1.一種利用靈芝蛋白制備的抗氧化多肽，其特征是：所述抗氧化多肽的氨基酸序列為：DVVKNAACG。

2.一種權利要求1所述的利用靈芝蛋白制備的抗氧化多肽的制備方法，其特征是：以靈芝為原料提取蛋白，然后采用堿性蛋白酶對其進行酶解，分離純化、冷凍干燥得到抗氧化多肽；

所述酶解條件為：pH為8.0、溫度45℃、酶解時間為9h、酶-底物配比為3000U/g；所述酶為堿性蛋白酶；

所述分離純化的手段包括超濾、SP-Sephadex C-25離子交換色譜、Sephadex G-50分子篩和RP-HPLC反相高效液相色譜；

所述分離純化的具體步驟為：（1）酶解產物首先利用分子量截留范圍為5000Da和10000Da的超濾膜對酶解產物進行超濾分離，將其分為3個分子量范圍不同的組分，分別為分子量大于10000Da的組分、分子量介于10000Da和5000Da的組分、分子量小于5000Da的組分；（2）收集具有最佳抗氧化活性的組分，再用SP-Sephadex C-25陽離子交換色譜進行分離，上樣后洗去未吸附組分，再以含0～0.35mol/L NaCl的0.02mol/L、pH8.0Tris－鹽酸緩沖液進行線性梯度洗脫，流速為0.5ml/min，在215nm下進行測量，測定各吸收峰對應的洗脫組分的抗氧化活性；（3）收集具有最佳抗氧化活性的峰，再用Sephadex G-50凝膠色譜進行分離，洗脫液為去離子水，流速為0.5ml/min，在215nm下進行測量，測定各吸收峰對應的洗脫組分的抗氧化活性；（4）收集具有最佳抗氧化活性的峰，再利RP-HPLC反相高效液相色譜進行進一步的分離，所用色譜柱為Gemini 5μ C18，上樣量為100μL，流速為1ml/min，檢測波長為215nm；洗脫液自含體積分數為10%乙腈和90%水的混合液開始，至體積分數為90%乙腈和10%水的混合液結束，進行梯度洗脫，收集體積分數為43%乙腈和57 %水處的洗脫峰,得到抗氧化多肽；

靈芝蛋白質提取方法為：將靈芝清洗3-5次，超聲波破碎，浸提；浸提pH為 8.0，料液比為20:1；浸提時間12h，離心10000g 20分鐘，收集上清液，經過濾、濃縮和冷凍干燥后得到靈芝蛋白。