[發(fā)明專利]一種蝸牛酶的提取方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201510086325.0
• 申請日: 2015-02-16
• 公開（公告）號: CN104560931B
• 公開（公告）日: 2018-03-06
• 發(fā)明（設計）人: 曾麗娟;路建京
• 申請（專利權）人: 威海瑞佳麗生物科技有限公司
• 主分類號: C12N9/88
• 分類號: C12N9/88;C12N9/64;C12N9/42;C12N9/26;C12N9/18
• 代理公司: 北京金智普華知識產權代理有限公司11401
• 代理人: 巴曉艷

技術領域

本發(fā)明是一種生物的提取技術，尤其涉及一種蝸牛酶的提取方法：它是一種從蝸牛嗦囊及消化道中提取的蝸牛酶的生物提取過程。

背景技術

在現(xiàn)有技術中，蝸牛酶的提取主要活體蝸牛在刺激下自身分泌出來的蝸牛粘液和蝸牛的內臟為原料，蝸牛粘液成分包括蛋白質，蝸牛酶，黏液素，硫酸軟骨素蛋白多糖，羥基乙酸等；蝸牛的嗦囊及消化道中含有20多種酶，蝸牛酶是多種混合酶；其中有纖維素酶，果膠酶，淀粉酶，蛋白酶等；價值高，廣泛應用在細胞學，基因工程學領域，在醫(yī)學上，飼料的添加劑，保健品都有應用。

目前國內并有沒有完成有效的提取蝸牛酶的提取技術，一方面蝸牛粘液的提取非常困難，不能對蝸牛內臟進行有效的分離，在提取的過程中，蝸牛酶損害嚴重，而且蝸牛酶的保存困難，影響保管運輸。

發(fā)明內容

本發(fā)明提供了一種蝸牛酶的提取方法，提取過程中充分提取蝸牛粘液，有效對蝸牛內臟進行有效的分離，降低減少蝸牛酶的活性。本發(fā)明的目的在于提供一種操作性強，提取度高并且能夠保證蝸牛酶的成分提取方法。

為了實現(xiàn)以上目的，本發(fā)明采用的技術方案是：

一種蝸牛酶的提取方法，其特征在于，包括以下步驟：

1)選取體重30-40克，月齡3個半月及4個月的健康蝸牛；

2)利用提取裝置對上述蝸牛進行具有活性酶的蝸牛粘液收集；

3)對2)中提取過蝸牛粘液的蝸牛進行蝸牛殼與蝸牛肉分開，在蝸牛肉中提取內臟，在內臟中提取含有蝸牛酶的棕色液體；

4)對上述2)與3)收集的含有活性酶的蝸牛粘液與棕色液體進行細胞的破碎水解；

5)對上述4)中水解過的含有蝸牛酶的水解物進行蝸牛酶提取，并經(jīng)脫色，靜置，分層后，取出上清液；

6)對上述5)提取的上清液進行三次過濾，過濾液為蝸牛酶提取液；

7)對上述過濾后的提取液進行結晶，獲得蝸牛酶制劑；

8)對上述蝸牛酶制劑進行包裝、入庫。

優(yōu)先地,用于所述步驟2)所述設備包括旋轉振動桶2、噴水器1和集液桶3；所述旋轉桶上設置有噴水器1，所述旋轉振動桶2外設置所述集液桶3，所述旋轉桶內可以放置蝸牛；所述旋轉振動桶2上均有分布有液體導出孔6，原液和水的混合液通過所述液體導出孔6流入所述集液桶3；所述集液桶3上設置有液體收集孔5；所述旋轉振動桶2下端設置有旋轉振動軸，所述旋轉振動軸通過轉動帶7連接第一電機88，并由所述轉動帶7帶動而轉動；所述旋轉振動軸還連接第二電機999，所述第二電機999使所述旋轉振動軸產生振動；第一電機88與第二電機999分別為橫向電機與縱向電機；所述電機的功率為1.5KW。

優(yōu)先地，所述2)收集的蝸牛粘液在4℃恒溫下保存待用。

優(yōu)先地，所述步驟3)提取內臟中的棕紅色液體，采用下列兩種方法之一：

第一種方法將蝸牛殼打破，將蝸牛肉和內臟分開，從蝸牛內臟里抽出嗦囊及消化道中的棕紅色液體；

第二種方法將水煮沸騰把蝸牛迅速放入，在沸水中放入3-5分鐘將蝸牛撈出放入冷水中，將蝸牛殼去掉，同時將蝸牛肉與內臟分開，內臟中找到棕紅色液體。

優(yōu)先地，所述步驟4)中進行水解采用的方法為高速離心泵，所述高速離心泵轉數(shù)在8000rpm-12000rpm；水解工作環(huán)境為-4℃；水解時間為10分鐘。

優(yōu)先地，所述步驟5)中進行利用有機溶液正丁醇提取蝸牛酶，所述正丁醇的量為水解溶液的3-5倍，加入苯甲基磺酰氟與基乙醇用于提高酶的穩(wěn)定性與防止氧化。

優(yōu)先地，所述步驟5)脫色是利用活性炭脫色，活性炭的用量在0.1％。

優(yōu)先地，所述的三次過濾分別為第一次粗濾截留大于直徑2um顆粒，第二次微濾直徑為0.2-2um的顆粒，第三次超濾截留直接20A-0.2um的顆粒。

優(yōu)先地，所述的結晶方法獲取蝸牛酶制劑采用下述兩種方法之一，第一種采用中性鹽硫酸銨，慢慢增加鹽濃度至渾濁為止，然后靜置進行結晶；第二種方法是對含酶溶液殺菌后直接采用冷凍干燥或噴霧干燥的方式結晶。

優(yōu)先地，所述步驟7)的結晶條件為酶的純度為50％以上，酶蛋白的溶度3-50mg/ml，溫度在0-4℃，PH值在4.5-6.5之間。

說明書附圖

圖1為發(fā)明涉及一種蝸牛酶提取方法的流程圖；

圖2為發(fā)明的蝸牛粘液收集器,包括1-噴水器、2-旋轉振動桶、3-集液桶、4-轉動軸、5-液體收集孔、6-液體導出孔、7-轉動帶、8-第一電機與9-第二電機。

具體實施方式