[發明專利]一種蝸牛酶的提取方法

有效

• 申請號: 201510086325.0
• 申請日: 2015-02-16
• 公開（公告）號: CN104560931B
• 公開（公告）日: 2018-03-06
• 發明（設計）人: 曾麗娟;路建京
• 申請（專利權）人: 威海瑞佳麗生物科技有限公司
• 主分類號: C12N9/88
• 分類號: C12N9/88;C12N9/64;C12N9/42;C12N9/26;C12N9/18
• 代理公司: 北京金智普華知識產權代理有限公司11401
• 代理人: 巴曉艷

1.一種蝸牛酶的提取方法，其特征在于，包括以下步驟：

1）選取體重30-40克，月齡3個半月及4個月的健康蝸牛；

2）利用提取裝置對上述蝸牛進行具有活性酶的蝸牛粘液收集；

3）對2）中提取過蝸牛粘液的蝸牛進行蝸牛殼與蝸牛肉分開，在蝸牛肉中提取內臟，在內臟中提取含有蝸牛酶的棕色液體；

4）對上述2）與3）收集的含有活性酶的蝸牛粘液與棕色液體進行細胞的破碎水解；

5）對上述4）中水解過的含有蝸牛酶的水解物進行蝸牛酶提取，并經脫色，靜置，分層后，取出上清液；

6）對上述5）提取的上清液進行三次過濾，過濾液為蝸牛酶提取液；

7）對上述過濾后的提取液進行結晶，獲得蝸牛酶制劑；

8）對上述蝸牛酶制劑進行包裝、入庫；

用于所述步驟2）所述提取裝置包括旋轉振動桶、噴水器和集液桶；所述旋轉振動桶上設置有噴水器，所述旋轉振動桶外設置所述集液桶，所述旋轉振動桶內可以放置蝸牛;所述旋轉振動桶上均有分布有液體導出孔，原液和水的混合液通過所述液體導出孔流入所述集液桶;所述集液桶上設置有液體收集孔;所述旋轉振動桶下端設置有旋轉振動軸，所述旋轉振動軸通過轉動帶連接第一電機，并由所述轉動帶帶動而轉動;所述旋轉振動軸還連接第二電機，所述第二電機使所述旋轉振動軸產生振動;第一電機與第二電機分別為橫向電機與縱向電機;所述電機的功率為1.5KW；

所述步驟3）提取內臟中的棕色液體，采用下列兩種方法之一：

第一種方法將蝸牛殼打破，將蝸牛肉和內臟分開，從蝸牛內臟里抽出嗦囊及消化道中的棕色液體；

第二種方法將水煮沸騰把蝸牛迅速放入，在沸水中放入3-5分鐘將蝸牛撈出放入冷水中，將蝸牛殼去掉，同時將蝸牛肉與內臟分開，內臟中找到棕色液體；

所述步驟4）中進行水解采用的方法為高速離心泵，所述高速離心泵轉數在8000rpm-12000rpm；水解工作環境為-4℃；水解時間為10分鐘；

所述步驟5）中進行利用有機溶液正丁醇提取蝸牛酶，所述正丁醇的量為水解溶液的3-5倍，加入苯甲基磺酰氟與基乙醇用于提高酶的穩定性與防止氧化。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述2）收集的蝸牛粘液在4℃恒溫下保存待用。

3.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟5）脫色是利用活性炭脫色，活性炭的用量在0.1％。

4.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述的三次過濾分別為第一次粗濾截留大于直徑2 μ m 顆粒，第二次微濾直徑為0.2-2μ m 的顆粒，第三次超濾截留直接20A-0.2μ m 的顆粒。

5.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述的結晶方法獲取蝸牛酶制劑采用下述兩種方法之一，第一種采用中性鹽硫酸銨，慢慢增加鹽濃度至渾濁為止，然后靜置進行結晶；第二種方法是對含酶溶液殺菌后直接采用冷凍干燥或噴霧干燥的方式結晶。

6.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟7）的結晶條件為酶的純度為50％以上，酶蛋白的溶度3-50mg/ml，溫度在0-4℃，PH值在4.5-6.5之間。