[發(fā)明專利]一種防風(fēng)的組織培養(yǎng)快繁方法

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201510086064.2
• 申請(qǐng)日: 2015-02-24
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN104686346A
• 公開(kāi)（公告）日: 2015-06-10
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 陳桂容
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 陳桂容
• 主分類(lèi)號(hào): A01H4/00
• 分類(lèi)號(hào): A01H4/00
• 代理公司: 玉林市振盛專利商標(biāo)代理事務(wù)所 45109
• 代理人: 吳安儀

技術(shù)領(lǐng)域

????本發(fā)明涉及農(nóng)業(yè)生物技術(shù)中植物組織培養(yǎng)的方法，具體地說(shuō)，涉及一種防風(fēng)的組織培養(yǎng)快繁方法。

背景技術(shù)

防風(fēng)（Saposhnikovia?divaricata）為傘形科藥用植物，其干燥根入藥，含有多種生物化學(xué)成分，具有解熱、鎮(zhèn)痛、抗炎、抑菌、抗腫瘤、抗病毒等作用。傳統(tǒng)的防風(fēng)獲取方法是采挖野生植物資源，由于盲目挖掘，不僅使野生資源日益減少而且嚴(yán)重破壞了自然界的生態(tài)平衡。此外，栽培品種的種性退化，產(chǎn)量和品質(zhì)下降，不能適應(yīng)規(guī)模化和標(biāo)準(zhǔn)化生產(chǎn)的需要。

????目前關(guān)于防風(fēng)的研究主要集中在植物資源、化學(xué)成分分析、生藥鑒定、藥理作用和臨床應(yīng)用等方面?，這些研究為以防風(fēng)為基源制劑的臨床應(yīng)用奠定了一定的基礎(chǔ)。隨著生物技術(shù)的發(fā)展，組織培養(yǎng)技術(shù)為防風(fēng)的規(guī)模化生產(chǎn)開(kāi)辟了新的途徑。至今為止，尚未見(jiàn)有關(guān)防風(fēng)離體再生體系的所道，這嚴(yán)重影響了防風(fēng)種苗繁殖的發(fā)展。因此，非常有必要建立系統(tǒng)的防風(fēng)離體快繁體系，為防風(fēng)種苗工業(yè)化生產(chǎn)提供技術(shù)支持。

發(fā)明內(nèi)容

????本發(fā)明的目的在于提供一種防風(fēng)的組織培養(yǎng)快繁方法，本發(fā)明以種子為外植體，通過(guò)愈傷組織誘導(dǎo)、增殖培養(yǎng)、不定芽誘導(dǎo)、根苗誘導(dǎo)以及試管苗馴化移栽等過(guò)程實(shí)現(xiàn)了防風(fēng)的組織培養(yǎng)快速繁殖，從而實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的目的。

?本發(fā)明的一種防風(fēng)的組織培養(yǎng)快繁方法，包括以下的工藝步驟：

?（1）外植體的處理：選取當(dāng)年收飽滿的防風(fēng)種子，以洗潔精水輕輕刷洗，置于自來(lái)水中沖洗10～30min后置于清水中浸泡8～12h，再轉(zhuǎn)入50～120mg/mL的赤霉素溶液中浸泡10～15h，然后在超凈工作臺(tái)中以75～80%乙醇溶液浸泡10～30s，無(wú)菌水沖洗3～5次，再用含有0.01～0.05%吐溫-20的0.1～0.5%升汞溶液消毒5～10min，無(wú)菌水沖洗3～5次后用無(wú)菌濾紙吸干表面的水分后備用。

（2）愈傷組織誘導(dǎo)：用無(wú)菌解剖刀在經(jīng)步驟（1）處理后的種子上割1～3刀造成傷口后接種到誘導(dǎo)培養(yǎng)基上進(jìn)行愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)，接種后在25～28℃條件下進(jìn)行全暗培養(yǎng)直至形成愈傷組織。

（3）增殖培養(yǎng)：愈傷組織生長(zhǎng)至20～30天后，將長(zhǎng)勢(shì)良好的愈傷組織轉(zhuǎn)接至增殖培養(yǎng)基中進(jìn)行增殖培養(yǎng)，接種后先在25～28℃條件下全暗培養(yǎng)1～3天，然后置于每天光照12～16小時(shí)，光照強(qiáng)度為2000～3000lx，培養(yǎng)溫度為25～28℃的條件下培養(yǎng)，20天左右轉(zhuǎn)接一次。

（4）不定芽誘導(dǎo)：將培養(yǎng)至15～20天的長(zhǎng)勢(shì)良好的愈傷組織轉(zhuǎn)接至分化培養(yǎng)基中進(jìn)行不定芽誘導(dǎo)，接種后先在25～28℃條件下全暗培養(yǎng)2～5天，然后置于每天光照12～16小時(shí)，光照強(qiáng)度為2000～3000lx，培養(yǎng)溫度為25～28℃的條件下培養(yǎng)直至形成不定芽。

（5）生根培養(yǎng)：當(dāng)叢生芽長(zhǎng)至2.5～3.5cm高時(shí)，將叢生苗切割成單苗接種至生根培養(yǎng)基中進(jìn)行生根培養(yǎng)，接種后先在25～28℃條件下全暗培養(yǎng)1～4天，然后置于每天光照12～16小時(shí)，光照強(qiáng)度為2000～3000lx，培養(yǎng)溫度為25～28℃的條件下培養(yǎng)直至長(zhǎng)出根。

（6）試管苗移栽：當(dāng)小苗長(zhǎng)出的新根系長(zhǎng)達(dá)2～3.5cm，并且長(zhǎng)出側(cè)根，苗高5cm以上時(shí)，將培養(yǎng)瓶瓶蓋打開(kāi)并置于自然光照下煉苗5～7天后，將試管苗從培養(yǎng)瓶中取出，洗掉根部培養(yǎng)基，盡量不傷害根部，栽入由黃沙土和火碳泥（1：1）混合成的基質(zhì)中并定植于大田中。

?上述步驟（2）所述的誘導(dǎo)培養(yǎng)基為：MS+?1～5mg/L?2,4-D+?0.5～2mg/L?6-BA+?0.1～1mg/L?KT+2.5%～3.5%蔗糖+0.35%～0.5%瓊脂+0.05%～0.1%活性炭，pH值為5.4～5.8。

?上述步驟（3）所述的增殖培養(yǎng)基為：MS+0.5～3.0mg/L?6-BA+0.1～1.0mg/L?NAA+2.5%～3.5%蔗糖+0.35%～0.5%瓊脂+0.05%～0.1%活性炭，pH值為5.4～5.8。

?上述步驟（4）所述的分化培養(yǎng)基為：MS+0.1～0.5mg/L?NAA+1.0～2.0mg/L?6-BA+2.5%～3.5%蔗糖+0.35%～0.5%瓊脂+0.05%～0.1%活性炭，pH值為5.4～5.8。

?上述步驟（5）所述的生根培養(yǎng)基為：1/2MS+0.05～0.5mg/L?6-BA+0.1～1.0mg/L?NAA+2.0%～2.5%蔗糖+0.4%～0.6%瓊脂+0.05%～0.1%活性炭，pH值為5.4～5.8。