[發明專利]一種防風的組織培養快繁方法

無效

• 申請號: 201510086064.2
• 申請日: 2015-02-24
• 公開（公告）號: CN104686346A
• 公開（公告）日: 2015-06-10
• 發明（設計）人: 陳桂容
• 申請（專利權）人: 陳桂容
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 玉林市振盛專利商標代理事務所 45109
• 代理人: 吳安儀

1.一種防風的組織培養快繁方法，其特征在于包括以下工藝步驟：

?（1）外植體的處理：選取當年收飽滿的防風種子，以洗潔精水刷洗，置于自來水中沖洗10～30min后置于清水中浸泡8～12h，再轉入50～120mg/mL的赤霉素溶液中浸泡10～15h，然后在超凈工作臺中以75～80%乙醇溶液浸泡10～30s，無菌水沖洗3～5次，再用含有0.01～0.05%吐溫-20的0.1～0.5%升汞溶液消毒5～10min，無菌水沖洗3～5次后用無菌濾紙吸干表面的水分后備用;

（2）愈傷組織誘導：用無菌解剖刀在經步驟（1）處理后的種子上割1～3刀造成傷口后接種到誘導培養基上進行愈傷組織誘導培養，接種后在25～28℃條件下進行全暗培養直至形成愈傷組織;

（3）增殖培養：愈傷組織生長至20～30天后，將長勢良好的愈傷組織轉接至增殖培養基中進行增殖培養，接種后先在25～28℃條件下全暗培養1～3天，然后置于每天光照12～16小時，光照強度為2000～3000lx，培養溫度為25～28℃的條件下培養，20天左右轉接一次;

（4）不定芽誘導：將培養至15～20天的長勢良好的愈傷組織轉接至分化培養基中進行不定芽誘導，接種后先在25～28℃條件下全暗培養2～5天，然后置于每天光照12～16小時，光照強度為2000～3000lx，培養溫度為25～28℃的條件下培養直至形成不定芽;

（5）生根培養：當叢生芽長至2.5～3.5cm高時，將叢生苗切割成單苗接種至生根培養基中進行生根培養，接種后先在25～28℃條件下全暗培養1～4天，然后置于每天光照12～16小時，光照強度為2000～3000lx，培養溫度為25～28℃的條件下培養直至長出根;

（6）試管苗移栽：當小苗長出的新根系長達2～3.5cm，并且長出側根，苗高5cm以上時，將培養瓶瓶蓋打開并置于自然光照下煉苗5～7天后，將試管苗從培養瓶中取出，洗掉根部培養基，盡量不傷害根部，栽入由黃沙土和火碳泥（1：1）混合成的基質中并定植于大田中。

2.根據權利要求1所述的一種防風的組織培養快繁方法，其特征在于步驟（2）所述的誘導培養基為：MS+?1～5mg/L?2,4-D+?0.5～2mg/L?6-BA+?0.1～1mg/L?KT+2.5%～3.5%蔗糖+0.35%～0.5%瓊脂+0.05%～0.1%活性炭，pH值為5.4～5.8。

3.根據權利要求1所述的一種防風的組織培養快繁方法，其特征在于步驟（3）所述的增殖培養基為：MS+0.5～3.0mg/L?6-BA+0.1～1.0mg/L?NAA+2.5%～3.5%蔗糖+0.35%～0.5%瓊脂+0.05%～0.1%活性炭，pH值為5.4～5.8。

4.根據權利要求1所述的一種防風的組織培養快繁方法，其特征在于步驟（4）所述的分化培養基為：MS+0.1～0.5mg/L?NAA+1.0～2.0mg/L?6-BA+2.5%～3.5%蔗糖+0.35%～0.5%瓊脂+0.05%～0.1%活性炭，pH值為5.4～5.8。

5.根據權利要求1所述的一種防風的組織培養快繁方法，其特征在于步驟（5）所述的生根培養基為：1/2MS+0.05～0.5mg/L?6-BA+0.1～1.0mg/L?NAA+2.0%～2.5%蔗糖+0.4%～0.6%瓊脂+0.05%～0.1%活性炭，pH值為5.4～5.8。