[發明專利]一種杜仲組織培養方法

無效

• 申請號: 201510085885.4
• 申請日: 2015-02-21
• 公開（公告）號: CN104686329A
• 公開（公告）日: 2015-06-10
• 發明（設計）人: 楊業云
• 申請（專利權）人: 楊業云
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 玉林市振盛專利商標代理事務所 45109
• 代理人: 邱振泉

技術領域

????本發明涉及植物生物技術中植物組織培養的方法，具體地說，涉及一種杜仲組織培養方法。

背景技術

?杜仲（Eucommia?ulmoides?Oliv.）是杜仲科杜仲屬多生年落葉喬木，為我國特有植物，主要分布于滇、川、桂及長江中下游等省市。杜仲是一種具有多種藥理功效的珍稀名貴藥用植物，也是一種最為理想的人體抗衰老保健中藥材。其干燥樹皮可入藥，具有補腎、健腰、強筋、壯骨、安胎、降壓等功效，且久服輕身耐老、延年益壽，因此被稱為中藥之上品。除此之外，杜仲還是提取杜仲膠的原材料，杜仲膠是一種天然高分子膠，具有耐腐蝕性強、絕緣性能極佳、可塑性好、耐壓強度高等特點。

杜仲野生資源已處于嚴重衰竭狀態，已被列為國家二級保護植物。目前，杜仲種苗主要是采用種子播種法進行繁育，由于種子發芽率低下，遠遠不能滿足大規模生產對杜仲種苗的需要。并且，種子繁殖后代之間在藥效成分、杜仲膠含量等方面均存差異，不利于杜仲優良品種的推廣。利用植物組織培養技術能有效解決瀕危珍稀物種拯救和野生植物資源匱乏的問題。因此很有必要建立杜仲組織培養技術，為其大規模工廠化生產奠定基礎。

發明內容

????本發明的目的在于提供出一種杜仲組織培養方法，本發明以杜仲帶芽莖段為外植體，經過芽誘導、芽增殖培養、生根培養、煉苗及移栽等過程實現了杜仲的離體再生，從而實現了本發明的目的。

?本發明的一種杜仲組織培養方法，包括以下的步驟：

（1）芽誘導培養：以華仲5號杜仲帶芽莖段作為外植體，剪去葉片，切成3.0～5.0長的帶有2～3個腋芽的節段先用洗衣粉溶液浸泡5～10min，再用軟毛刷輕輕刷洗外植體表面將其表面的塵土和部分菌體去除，然后用自來水沖洗1～3h后置于超凈工作臺中，先用75%乙醇消毒5～30s后用無菌水洗3～5次，再用0.1%升汞溶液消毒10～25min，用無菌水沖洗4～6次再用無菌濾紙擦干表面的水珠后接種到芽誘導培養基進行芽誘導，接種后先在25～28℃條件下全暗培養1～3天，然后置于每天光照10～12小時，光照強度為1500～2000lx條件下培養30天，統計其芽誘導率及生長情況。

（2）增殖培養：將步驟（1）培養得到的生長正常、有明顯莖、葉結構的芽體切下并轉入增殖培養基上進行繼代培養，接種后先在25～28℃條件下全暗培養1～3天，然后置于每天光照10～12小時，光照強度為1000～2000lx，置于培養溫度為25～28℃的條件下培養30天后觀察生長情況和芽增殖情況。多次反復切割芽體進行繼代培養，以得到更多的叢生芽。

（3）生根培養：將步驟（1）或（2）過程獲得的高度約為2.5～3.5cm、生長良好、無褐化、玻璃化和白化現象的不定芽分切接種到生根培養基上進行生根培養，接種后先在25～28℃條件下全暗培養1～3天，然后置于每天光照11～12小時，光照強度為2000～3000lx，培養溫度為25～28℃的條件下培養1個月后統計生根情況。

（4）煉苗移栽：將步驟（3）獲得的高約6～8cm的生長良好且健壯的生根試管苗去瓶蓋置于自然光照下煉苗5～7天后，將試管苗從培養瓶中取出，洗掉根部培養基，栽入由營養土：珍珠巖＝3:1混合成的基質,置于光照培養箱內培養，每天以1/2MS大量元素營養液給幼苗澆水，保持濕度。待幼苗成活后再移栽大田。

上述步驟（1）所述的芽誘導培養基為：MS+1～5mg/L6-BA+0.5～2mg/L?NAA+15～30g/L蔗糖+3.5～6.0g/L瓊脂，pH為5.4～5.8。

上述步驟（2）所述的增殖培養基為：MS+0.1～1.0mg/LNAA+1～6mg/L?6-BA+15～30g/L蔗糖+3.5～6.0g/L瓊脂，pH為5.4～5.8。

上述步驟（3）所述的生根培養基為：1/4MS+0.1～1mg/L?NAA+0.1～1mg/L?IBA+15～30g/L蔗糖+3.5～6.0g/L瓊脂，pH為5.4～5.8。

????與現有技術相比本發明的優點是：本發明通過植物組織培養技術短時間內快速獲得大量杜仲優良品種苗木的方法。以杜仲帶芽莖段為外植體，經過芽誘導、芽增殖培養、生根培養、煉苗及移栽等過程實現了杜仲的離體再生，為其大量選育、快速繁殖、新品種推廣提供技術支持。

具體實施方式

????以下實施例是對本發明的進一步說明，不是對本發明的限制。

????實施例1：