[發明專利]一種杜仲組織培養方法

無效

• 申請號: 201510085885.4
• 申請日: 2015-02-21
• 公開（公告）號: CN104686329A
• 公開（公告）日: 2015-06-10
• 發明（設計）人: 楊業云
• 申請（專利權）人: 楊業云
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 玉林市振盛專利商標代理事務所 45109
• 代理人: 邱振泉

1.一種杜仲組織培養方法，其特征在于包括以下步驟：

（1）芽誘導培養：以華仲5號杜仲帶芽莖段作為外植體，剪去葉片，切成3.0～5.0長的帶有2～3個腋芽的節段先用洗衣粉溶液浸泡5～10min，再用毛刷刷洗外植體表面將其表面的塵土和部分菌體去除，然后用自來水沖洗1～3h后置于超凈工作臺中，先用75%乙醇消毒5～30s后用無菌水洗3～5次，再用0.1%升汞溶液消毒10～25min，用無菌水沖洗4～6次再用無菌濾紙擦干表面的水珠后接種到芽誘導培養基進行芽誘導，接種后先在25～28℃條件下全暗培養1～3天，然后置于每天光照10～12小時，光照強度為1500～2000lx條件下培養30天，統計其芽誘導率及生長情況；

（2）增殖培養：將步驟（1）培養得到的生長正常、有明顯莖、葉結構的芽體切下并轉入增殖培養基上進行繼代培養，接種后先在25～28℃條件下全暗培養1～3天，然后置于每天光照10～12小時，光照強度為1000～2000lx，置于培養溫度為25～28℃的條件下培養30天后觀察生長情況和芽增殖情況，多次反復切割芽體進行繼代培養，得到叢生芽；

（3）生根培養：將步驟（1）或（2）過程獲得的高度約為2.5～3.5cm、生長良好、無褐化、玻璃化和白化現象的不定芽分切接種到生根培養基上進行生根培養，接種后先在25～28℃條件下全暗培養1～3天，然后置于每天光照11～12小時，光照強度為2000～3000lx，培養溫度為25～28℃的條件下培養1個月后統計生根情況；

（4）煉苗移栽：將步驟（3）獲得的高約6～8cm的生長良好且健壯的生根試管苗去瓶蓋置于自然光照下煉苗5～7天后，將試管苗從培養瓶中取出，洗掉根部培養基，栽入由營養土：珍珠巖＝3:1混合成的基質,置于光照培養箱內培養，每天以1/2MS大量元素營養液給幼苗澆水，保持濕度，待幼苗成活后再移栽大田。

2.根據權利要求1所述的一種杜仲組織培養方法，其特征在于步驟（1）所述的芽誘導培養基為：MS+1～5mg/L6-BA+0.5～2mg/L?NAA+15～30g/L蔗糖+3.5～6.0g/L瓊脂，pH為5.4～5.8。

3.根據權利要求1所述的一種杜仲組織培養方法，其特征在于步驟（2）所述的增殖培養基為：MS+0.1～1.0mg/LNAA+1～6mg/L?6-BA+15～30g/L蔗糖+3.5～6.0g/L瓊脂，pH為5.4～5.8。

4.根據權利要求1所述的一種杜仲組織培養方法，其特征在于步驟（3）所述的生根培養基為：1/4MS+0.1～1mg/L?NAA+0.1～1mg/L?IBA+15～30g/L蔗糖+3.5～6.0g/L瓊脂，pH為5.4～5.8。