[發明專利]微生物發酵生產低溫γ-內酰胺酶的方法

在審

• 申請號: 201510084710.1
• 申請日: 2015-02-16
• 公開（公告）號: CN104630196A
• 公開（公告）日: 2015-05-20
• 發明（設計）人: 李曉艷;王曉輝;竇少華;于爽;張慶芳;遲乃玉;張旭姣;王強;金連豆
• 申請（專利權）人: 大連大學
• 主分類號: C12N9/86
• 分類號: C12N9/86
• 代理公司: 大連智高專利事務所(特殊普通合伙) 21235
• 代理人: 胡景波

技術領域

本發明涉及微生物學、酶工程、發酵工程、生物化學等領域，具體涉及一種微生物發酵生產低溫γ-內酰胺酶的方法。

背景技術

γ-內酰胺酶(γ-lactamses，EC?3.5.2.-)是催化酰胺類化合物酰胺鍵水解的一種新型酰胺酶。(+)γ-內酰胺酶能夠高效率動力學拆分外消旋體γ-內酰胺，獲得光學純的(-)γ-內酰胺。光學純的(-)γ-內酰胺是制備抗病毒藥物的手性中間體，是抗艾滋病藥物(-)阿巴卡韋和(-)卡巴韋的合成原料，也是抗流感藥物帕拉米韋的合成原料。此外，γ-內酰胺酶催化外消旋體γ-內酰胺還可獲得不同構型的γ-氨基丁酸類似物(GABA)。GABA是一種抑制性神經遞質，它參與多種代謝活動，具有很高的生理活性[1]。人們在發現(+)γ-內酰胺酶之前，一般采用不對稱合成的方法制備光學純的(-)γ-內酰胺，此方法的缺點是原料昂貴、工藝繁瑣、生產成本高、造成環境污染，不利于工業化生產[2]。運用γ-內酰胺酶進行工業化生產(-)γ-內酰胺，具有反應條件溫和、工藝簡單、生產成本低、環境友好、產物光學純度高等優點。目前對微生物發酵生產γ-內酰胺酶的研究處于γ-內酰胺酶產生菌種的選育和產酶條件優化[3～5]、酶學性質以及相關基因克隆階段[6～8]，且主要集中于中溫γ-內酰胺酶，目前國內外還未見微生物發酵生產低溫γ-內酰胺酶的相關研究報道，微生物發酵生產低溫γ-內酰胺酶具有廣闊的開發潛力和應用前景。

參考文獻：

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[2]Velazquez?F.,Olivo?HF.The?application?ofchiraloxazolidinethiones?and?thiazolidine-thioned?in?asymmetric?synthesis.Current?Organic?Chemistry,2002；

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[8]Yang?M,Gao?Q,Wu?S,et?al.Characterization?of?a?recombinant(-)γ-lactamase?from?Microbacterium?hydrocarbonoxydans.Biotechnology?Letters,2012。

發明內容

本發明的目的是提供一種微生物發酵生產低溫γ-內酰胺酶的方法，該方法是將能產生γ-內酰胺酶菌種先活化，再經過低溫馴化，最后于10～16℃下液體發酵生產低溫γ-內酰胺酶，這種生產方法獲得的低溫γ-內酰胺酶經過分離和純化，可以得到不同濃度和純度的酶制劑。本發明所述的一種微生物發酵生產低溫γ-內酰胺酶的方法具體包括以下步驟：