[發明專利]海洋微生物發酵生產低溫葡萄糖氧化酶的方法

在審

• 申請號: 201510084670.0
• 申請日: 2015-02-16
• 公開（公告）號: CN104630167A
• 公開（公告）日: 2015-05-20
• 發明（設計）人: 王曉輝;李曉艷;竇少華;于爽;張慶芳;遲乃玉;王強;張旭姣;金連豆
• 申請（專利權）人: 大連大學
• 主分類號: C12N9/04
• 分類號: C12N9/04
• 代理公司: 大連智高專利事務所(特殊普通合伙) 21235
• 代理人: 胡景波

1.海洋微生物發酵生產低溫葡萄糖氧化酶的方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)將能產生葡萄糖氧化酶的菌種先活化，再經過逐級低溫馴化，馴化溫度由高到低，25℃→22℃→20℃→18℃→16℃→14℃→12℃→10℃，使其在低溫環境中生長良好，當菌種能在低溫下穩定生長即馴化結束；該菌種的低溫馴化培養基為：葡萄糖20.0～50.0g，蛋白胨1.0～5.0g，(NH₄)₂SO₄2.0～3.0g，CaCO₃1.0～5.0g，pH值為自然，于103kpa、121℃高壓蒸氣滅菌30min；

所述的能產生葡萄糖氧化酶的菌種來源于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(CGMCC)，菌種編號：1.10601或1.6446或1.10904；

(2)按常規方法將步驟(1)中低溫馴化后的葡萄糖氧化酶產生菌在液體種子培養基中于10～16℃逐級擴大培養，制備成液體一級種子和二級種子；所述的液體種子培養基為：蛋白胨7.0～12.0g,牛肉膏2.0～7.0g,NaCl?8.0～11.0g,pH值為自然,于103kpa、121℃高壓蒸氣滅菌30min。

(3)將液體二級種子按發酵液體積3～9％的接種量接入液體產酶培養基中，在10～16℃培養72～144h時，即海洋微生物發酵生產低溫葡萄糖氧化酶結束；所述的液體產酶培養基為：葡萄糖75.0～85.0g,蛋白胨1.0～5.0g,KH₂PO₄1.4～2.0g,MgSO₄·7H₂O?0.7～0.8g,KCl?0.2～0.6g,pH值為5.6,于103kpa、121℃高壓蒸氣滅菌30min。

(4)將(3)的發酵液在4,000～8,000rpm離心收集液體，收集到的上清液即為粗酶液。

(5)根據不同需要和使用對象不同，還可以將(4)得到的粗酶液進一步濃縮、分離純化，制備成不同活性、純度和劑型的低溫葡萄糖氧化酶制劑。

2.根據權利要求1所述的海洋微生物發酵生產低溫葡萄糖氧化酶的方法，其特征在于，步驟(1)中產生葡萄糖氧化酶的菌種活化培養基為：蛋白胨10.0g,酵母膏5.0g,NaCl?10.0g,瓊脂20.0g，蒸餾水1.0L，pH值為自然，于103kpa、121℃高壓蒸氣滅菌30min。