[發明專利]一種用于測量從活的生物細胞跨細胞膜轉運被分析物的方法

有效

• 申請號: 201510083796.6
• 申請日: 2009-07-01
• 公開（公告）號: CN104634802B
• 公開（公告）日: 2019-03-08
• 發明（設計）人: 伊娃·R·比恩鮑姆;勒維卡·L·E·米勒;洛里·J·彼得森;詹妮弗·A·伯格;本杰明·P·沃納
• 申請（專利權）人: XRpro科學有限公司
• 主分類號: G01N23/223
• 分類號: G01N23/223;G01N33/68
• 代理公司: 中原信達知識產權代理有限責任公司 11219
• 代理人: 楊青;穆德駿

1.用于測量從活的生物細胞跨細胞膜轉運被分析物的方法，所述方法包括以下步驟：

a)提供一種或多種表達多個離子通道的活的生物細胞，所述細胞載有被分析物；

b)從所述細胞跨離子通道卸載至少部分所述被分析物；

c)使用x-射線熒光測量所述被分析物，其中所述x-射線熒光測量使用了裝配有微聚集X-射線管的能量色散x-射線熒光分光儀；以及

d)重復步驟b)和c)，以便在一段時間內獲得多個測量值。

2.如權利要求1所述的用于測量從活的生物細胞跨細胞膜轉運被分析物的方法，其中測量x-射線熒光包括使用多色x-射線束激發被分析物，以及使用x-射線檢測器測量x-射線熒光。

3.如權利要求1所述的用于測量從活的生物細胞跨細胞膜轉運被分析物的方法，其中被卸載的被分析物從一個體積中去除，所述體積由入射到細胞上的x-射線熒光激發光束的面積，以及被分析物在水中的至少一種特征性信號的1/e衰減深度的5倍的深度來確定。

4.如權利要求1所述的用于測量從活的生物細胞跨細胞膜轉運被分析物的方法，還包括在測量x-射線熒光前減少基質。

5.如權利要求1所述的用于測量從活的生物細胞跨細胞膜轉運被分析物的方法，其中在使細胞裝載被分析物之前，在一個體積中，被分析物被耗盡，所述體積由入射到細胞上的x-射線熒光激發光束的面積，以及被分析物在水中的至少一種特征性信號的1/e衰減深度的5倍的深度來確定。

6.如權利要求1所述的用于測量從活的生物細胞跨細胞膜轉運被分析物的方法，其中被分析物包括選自鋅，鎘，鉈，鈉，鉀，銣，銫，鎂，鈣，鋇，鍶，氯，溴和碘的化學元素。

7.如權利要求1所述的用于測量從活的生物細胞跨細胞膜轉運被分析物的方法，其中細胞被保留在腔室中，其中所述腔室的至少一部分半透過或透過x-射線。

8.如權利要求7所述的用于測量從活的生物細胞跨細胞膜轉運被分析物的方法，其中所述腔室半透過x-射線的部分使被分析物位于半透過x-射線位置1微米內的部分所發射的，與半透過x-射線位置垂直，并且入射到半透過x-射線位置上的最高能量x-射線熒光信號的至少0.1％通過。

9.如權利要求1所述的用于測量從活的生物細胞跨細胞膜轉運被分析物的方法，其中細胞為固定化的，以使得數量等于x-射線熒光測量開始時位于x-射線熒光激發光束的光路中的細胞的至少1％的細胞在x-射線熒光激發光束的光路中保留的時間大于x-射線熒光測量的測量時間。

10.如權利要求1所述的用于測量從活的生物細胞跨細胞膜轉運被分析物的方法，其中細胞為固定化的，以使得數量等于x-射線熒光測量開始時位于x-射線熒光激發光束的光路中的細胞的至少1％的細胞在x-射線熒光激發光束的光路中保留至少10s。

11.如權利要求2所述的用于測量從活的生物細胞跨細胞膜轉運被分析物的方法，還包括腔室，其中所述腔室和x-射線激發光束以及x-射線檢測器的定位允許細胞群的至少一部分占據由x-射線激發光路與x-射線檢測器的可視容積的交集所確定的體積。

12.如權利要求11所述的用于測量從活的生物細胞跨細胞膜轉運被分析物的方法，其中占據由x-射線激發光路與x-射線檢測器的可視容積的交集所確定的體積的細胞群的所述至少一部分包括至少100pg被分析物。

13.如權利要求12所述的用于測量從活的生物細胞跨細胞膜轉運被分析物的方法，其中細胞與x-射線熒光檢測器之間的任何屏障使位于屏障的5μm內的被分析物發射的垂直于屏障的最高能量x-射線熒光信號的部分衰減小于99.9％，或允許來自被分析物的最高能量x-射線熒光信號的至少0.1％通過。