[發明專利]一種用于測量從活的生物細胞跨細胞膜轉運被分析物的方法

有效

• 申請號: 201510083796.6
• 申請日: 2009-07-01
• 公開（公告）號: CN104634802B
• 公開（公告）日: 2019-03-08
• 發明（設計）人: 伊娃·R·比恩鮑姆;勒維卡·L·E·米勒;洛里·J·彼得森;詹妮弗·A·伯格;本杰明·P·沃納
• 申請（專利權）人: XRpro科學有限公司
• 主分類號: G01N23/223
• 分類號: G01N23/223;G01N33/68
• 代理公司: 中原信達知識產權代理有限責任公司 11219
• 代理人: 楊青;穆德駿

本發明提供用于測量從活的生物細胞跨細胞膜轉運被分析物的方法，所述方法包括以下步驟：a)提供一種或多種表達多個離子通道的活的生物細胞，所述細胞載有被分析物；b)從所述細胞穿過離子通道卸載至少部分所述被分析物；c)使用x?射線熒光測量所述被分析物，其中所述x?射線熒光測量使用了裝配有微聚集X?射線管的能量色散x?射線熒光分光儀。

本申請為國際申請日2009年7月1日、國際申請號 PCT/US2009/049444于2011年1月4日進入中國國家階段、申請號 200980125952.3、發明名稱“用于測量被分析物跨屏障轉運的方法和裝置”的分案申請。

相關申請/要求優先權

本申請涉及并要求2008年7月1日提交的名稱為用于測量化學物質跨細胞膜轉運的免標記測定法的臨時申請No.US61/133,697；以及 2009年2月20日提交的名稱為用于測量跨膜轉運的方法和裝置的臨時申請No.US61/208,115的優先權；并且這些臨時申請并入本文作為參考。

政府的權利

本發明根據美國國立衛生研究院授予的合同號1R43GM080781-01 在美國政府的支持下進行。美國政府享有本發明的某些權利。

技術領域

本發明涉及用于測量跨膜轉運率的方法和裝置。

背景技術

對潛在重要藥物的鑒定常常需要測量這些藥物對離子跨膜轉運的影響。例如，一些藥物所產生的危及生命的毒性與心臟復極化延遲或與離子的遷移有關的QT間期延長有關。例如，近來有數種藥物退市的原因就是其對細胞膜轉運系統有影響。

離子通道是無所不在的允許離子跨細胞膜轉運的成孔蛋白。離子通道促進特定離子種類(例如，Na⁺，K⁺，Ca²⁺，Cl^-)在細胞小室之間和/或跨過具有不同離子選擇性的外部細胞膜的遷移。離子通道為動態結構，其對外界因素，如電壓梯度，配體和機械力產生應答。制藥工業開發出了改變離子通道功能的治療法。例子包括抗癲癇劑，如鈉離子通道阻滯劑卡馬西平，抗高血壓劑二氫吡啶類鈣通道阻滯劑(絡活喜)和用于糖尿病的磺脲類鉀通道開放劑(亞莫利)。近來，離子通道靶向藥物的總年銷售額為200億美元。

對于藥物開發，離子通道是較難的分子靶點。困難緣于適宜高通量篩選分析形式的缺乏，離子通道生物物理學的復雜性，以及藥物的潛在結合位點和結合模式的范圍。

對用于測量離子的跨膜轉運率的更簡單方法的需求仍然存在。

因此，本發明的目的在于提供用于測量離子的跨膜轉運率的方法和裝置。

本發明的其它目的，優點和新特征一部分將在下面的描述中提及，一部分對本領域技術人員而言可以通過研究下文而變得顯而易見，或者通過本發明的實施來獲悉。本發明的目的和優點可以通過權利要求書中特別指出的儀器和組合物來了解和獲得。

附圖簡述

合并入并形成說明書的一部分的附圖說明了本發明的實施方案，并與描述一起起到解釋本發明的原則的作用。在圖中：

圖1顯示了本發明的方法的流程圖；

圖2顯示了本發明的方法的另一流程圖；

圖3顯示了本發明的裝置的示意圖；

圖4顯示了本發明的裝置的另一示意圖；

圖5顯示了水中x射線的1/e衰減深度計算值的曲線

圖6顯示了一組銣流出率數據。

圖7顯示了銣流出率對抑制劑濃度的曲線。

圖8顯示了本發明的裝置的示意圖。