[發(fā)明專利]注射用A群鏈球菌藥物的制備方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201510082767.8
• 申請(qǐng)日: 2015-02-16
• 公開（公告）號(hào): CN104644693B
• 公開（公告）日: 2018-08-14
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 邢晉華;王成華;張守洋;宋昭震;李京平
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 國(guó)藥集團(tuán)魯亞（山東）制藥有限公司
• 主分類號(hào): A61K35/744
• 分類號(hào): A61K35/744;A61K9/19;A61K47/22;A61P35/00
• 代理公司: 濟(jì)寧眾城專利事務(wù)所 37106
• 代理人: 李效寧

本發(fā)明公開了一種注射用A群鏈球菌藥物及其制備方法。藥物的組分含量是：A群鏈球菌占3%~6%(W/W)，麥芽糖占13%~26%(W/W)，蛋氨酸占55%~75%(W/W)，氯化鈉占0.3%~0.5%(W/W)，青霉素G鉀6%~12%(W/W)。制備方法包括群鏈球菌冷凍管活化及血斜面培養(yǎng)、接種培養(yǎng)、滅活、配制、冷凍干燥等步驟。本發(fā)明的藥物保持A群鏈球菌在青霉素G鉀滅活過程中不被完全殺死，使其保留了使癌細(xì)胞裂解的抗癌活性，并且保持A群鏈球菌經(jīng)青霉素滅活細(xì)胞壁缺損后的穩(wěn)定衡一狀態(tài)，能夠在使用時(shí)恢復(fù)活性低副作用的情況下發(fā)揮其臨床療效，而該制備方法能夠制備出穩(wěn)定的產(chǎn)品。

技術(shù)領(lǐng)域：

本發(fā)明屬醫(yī)藥生物技術(shù)領(lǐng)域，主要涉及一種注射液用A群鏈球菌藥物及其制備方法，其目的旨在解決生產(chǎn)過程中A群鏈球菌經(jīng)滅活，細(xì)胞壁受到損傷后，如何保持橫一狀態(tài)的問題。

背景技術(shù)：

A群鏈球菌是β-溶血性鏈球菌SIPI722#低毒菌株，它類似日本生產(chǎn)的OK-432（Picibanil），于1967年首次被日本學(xué)者Toyate等應(yīng)用于臨床。該產(chǎn)品通過活化巨噬細(xì)胞、NK細(xì)胞、誘生可溶性細(xì)胞因子（IFN-γ、TNF-α、IL-2）發(fā)揮作用，同時(shí)它還能阻礙DNA、RNA合成蛋白產(chǎn)物的翻譯而使腫瘤細(xì)胞變性、崩解，從而產(chǎn)生直接的殺瘤效應(yīng)。目前在臨床上主要用于治療惡性胸腔積液，瘤內(nèi)及全身用藥對(duì)實(shí)體瘤有一定療效，常用于配合手術(shù)、放療或化療，用于惡性腫瘤的輔助治療。A群鏈球菌如果不經(jīng)滅活是一種致病菌，在滅活后，如果沒有合適的保護(hù)條件，細(xì)菌在藥品的配制及冷凍干燥過程中很容易死亡，或者細(xì)菌重新恢復(fù)活性，造成藥物失效或者增加臨床使用的副作用。

發(fā)明內(nèi)容：

本發(fā)明的目的是提供一種注射用A群鏈球菌藥物的制備方法，藥物能夠方便凍干狀態(tài)下存儲(chǔ)又能在使用時(shí)保證低副作用下的抗癌活性，而該制備方法能生產(chǎn)出符合要求的藥物。

本發(fā)明的目的是以如下方式實(shí)現(xiàn)的：該注射用A群鏈球菌藥物，組分含量按質(zhì)量份是：A群鏈球菌占3~6份，麥芽糖占13~26份，蛋氨酸占55~75份，氯化鈉占0.3~0.5份，青霉素G鉀占6~12份。其中的麥芽糖可選用上海藍(lán)季科技有限公司生產(chǎn)的產(chǎn)品，蛋氨酸可選用石家莊冀榮藥業(yè)有限公司生產(chǎn)的產(chǎn)品，青霉素G鉀可選用山東魯抗醫(yī)藥股份有限公司生產(chǎn)的產(chǎn)品。

制備以上A群鏈球菌組合物的方法，按規(guī)格為1KE的藥物1萬(wàn)支為例，不同批量按比例投料，制備步驟如下：

a. A群鏈球菌冷凍管活化及血瓊脂斜面培養(yǎng)：取凍干管一支，直接加入無(wú)菌生理鹽水溶解后，接入5％酵母粉培養(yǎng)基中于37±0.5℃活化培養(yǎng)18-24小時(shí)，然后涂片鏡檢，確認(rèn)鏈球菌生長(zhǎng)正常無(wú)污染后，將菌株接入血瓊脂斜面于37±0.5℃培養(yǎng)18-24小時(shí)；

b.接種培養(yǎng)：采用三級(jí)培養(yǎng)法，第一級(jí)培養(yǎng)系將菌種從血瓊脂斜面接種入一級(jí)酵母浸膏粉培養(yǎng)基內(nèi)于37±0.5℃培養(yǎng)20小時(shí)，培養(yǎng)液經(jīng)涂片鏡檢，確認(rèn)鏈球菌生長(zhǎng)正常無(wú)污染后，按5% v/v的接種量接入二級(jí)酵母浸膏粉培養(yǎng)基中，于37±0.5℃培養(yǎng)20小時(shí)，與接種二級(jí)同樣的方法，將菌種接入三級(jí)酵母粉培養(yǎng)基內(nèi)，于37±0.5℃培養(yǎng)20小時(shí)；

c.滅活：取3級(jí)培養(yǎng)的A群鏈球菌菌體，經(jīng)0.45μm濾膜過濾，經(jīng)無(wú)菌0.9%氯化鈉溶液分三次洗去殘余培養(yǎng)基，獲得生產(chǎn)用A群鏈球菌菌體；加入12萬(wàn)μ/ml青霉素G鉀的10%麥芽糖的無(wú)菌溶液400ml，pH值為7.5，37℃水浴加入30分鐘后，繼續(xù)升溫至45℃加熱20分鐘；

d.配制：向上述菌液中加入繼續(xù)加入12萬(wàn)μ/ml青霉素G鉀的0.9%氯化鈉無(wú)菌溶液100ml搖勻，本溶液用磷酸二氫鉀和氫氧化鈉將pH值預(yù)調(diào)至7.5；取樣后，按2000版?中國(guó)生物制品規(guī)程?中規(guī)定的濃度測(cè)定方法測(cè)含量，補(bǔ)加按1- 2%無(wú)菌蛋氨酸溶液至1萬(wàn)ml，本溶液用磷酸二氫鉀和氫氧化鈉將pH值預(yù)調(diào)至7.5，攪勻，灌裝，每瓶裝量1ml；