[發(fā)明專利]一種用于防治葡萄霜霉病的巨大芽孢桿菌及其懸浮劑

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201510082296.0
• 申請日: 2015-02-15
• 公開（公告）號: CN104673720B
• 公開（公告）日: 2017-07-11
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王貽蓮;李紀(jì)順;扈進(jìn)冬;楊合同;謝雪迎
• 申請（專利權(quán)）人: 山東省科學(xué)院生物研究所
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;A01N63/00;A01P3/00;C12R1/11
• 代理公司: 濟(jì)南舜源專利事務(wù)所有限公司37205
• 代理人: 于曉曉

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，特別是涉及一種用于防治葡萄霜霉病的巨大芽孢桿菌及其懸浮劑。

背景技術(shù)

葡萄霜霉病是一種世界性病害，是葡萄最主要的病害之一，一般在5～6月開始發(fā)生，8～9月進(jìn)入發(fā)病盛期，主要為害葉片，嚴(yán)重影響葉片的光合作用，嚴(yán)重時(shí)常造成葉片焦枯早落，影響果實(shí)品質(zhì)及產(chǎn)量，致減產(chǎn)30％～50％，重者達(dá)80％以上。該病菌屬鞭毛菌亞門，菌絲體在寄主細(xì)胞間蔓延，以球狀吸器伸入寄主細(xì)胞吸收養(yǎng)料。葡萄霜霉病主要危害植物的葉片、新梢、卷須等組織；發(fā)病嚴(yán)重時(shí)，果實(shí)產(chǎn)量降低、品質(zhì)變劣。防治葡萄霜霉病的方法有抗病育種，化學(xué)防治和生態(tài)防治(控制溫濕)等。由于抗病育種周期長且抗性易喪失；化學(xué)防治存在易產(chǎn)生抗藥性和對人、環(huán)境污染的問題；而生態(tài)防治的控制溫濕需要葡萄秧苗苗齡、長勢和天氣情況都合適的情況下才能進(jìn)行，應(yīng)用受條件限制。近年來，生物防治技術(shù)由于具有防止對象針對性強(qiáng)，防效高；對人、畜安全，沒有環(huán)境污染等優(yōu)點(diǎn)而日益受到重視。

生物防治葡萄霜霉病的方法主要包括植物提取物防治、植物抗病性誘導(dǎo)和利用生防菌。目前，已有十余種植物提取物能夠有效防治葡萄霜霉病。但是，植物提取物的提取過程繁瑣、生產(chǎn)成本高和人工合成單一物質(zhì)的使用后病原菌易產(chǎn)生抗藥性等缺點(diǎn)，使得該方法難于應(yīng)用。因此，利用生防菌防治葡萄霜霉病可彌補(bǔ)以上不足。

目前，利用生防菌防治葡萄霜霉病研究中，已有利用細(xì)菌中的蒼白桿菌、枯草芽孢桿菌、短小芽孢桿菌、以及放線菌中的利迪鏈霉菌等拮抗微生物的報(bào)道(臧超群，趙奎華，等。生防細(xì)菌SY286的篩選及其對葡萄霜霉病的防治效果研究[J]。中國生物防治學(xué)報(bào)，2014，30(3)：402-407)。未見利用巨大芽孢桿菌防治該病的報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的就是針對上述存在的缺陷而提供一種用于防治葡萄霜霉病的巨大芽孢桿菌，用于葡萄霜霉病的巨大芽孢桿菌(Bacillus megaterium)的菌株BMJBN02，已于2015年1月30日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏編號為CGMCC NO.10478。本發(fā)明還公開了利用上述菌株生產(chǎn)的微生物菌劑及其制備方法。本發(fā)明菌株BMJBN02對葡萄霜霉病特異性強(qiáng)，且防效高，平均防效在70％以上。

本發(fā)明的一種用于防治葡萄霜霉病的巨大芽孢桿菌及其懸浮劑技術(shù)方案為，一種用于防治葡萄霜霉病的巨大芽孢桿菌，于山東省壽光韭菜田土壤中分離所得，巨大芽孢桿菌Bacillus megaterium BMJBN02，于2015年1月30日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，地址：北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號，郵編：100101，保藏編號為CGMCC NO.10478，菌種的拉丁文名稱是Bacillus megaterium。具有使霜霉病孢子囊變形的作用。

該菌為革蘭氏陽性菌，桿狀，末端圓，呈長鏈狀排列。。能運(yùn)動。芽孢橢圓形，中生或次生。可液化明膠、胨化牛奶、水解淀粉、使霜霉病孢子囊變形。

所述的一種用于防治葡萄霜霉病的巨大芽孢桿菌的懸浮劑，將巨 大芽孢桿菌Bacillus megaterium BMJBN02發(fā)酵得到的發(fā)酵液與表面活性劑、防腐劑、懸浮助劑和增稠劑混合制備懸浮劑。

所述的一種用于防治葡萄霜霉病的巨大芽孢桿菌的懸浮劑，由以下步驟制得：

(1)種子液的獲得：將生防菌BMJBN02接種到液體LB培養(yǎng)基，30℃，200rpm振蕩培養(yǎng)12～18小時(shí)，取樣測定600nm處的OD值，測定過程中以未接種的液體LB培養(yǎng)基調(diào)零；

(2)發(fā)酵液的獲得：當(dāng)步驟(1)中OD值為0.5～0.8時(shí)，將種子液按1:150體積比加入裝有發(fā)酵培養(yǎng)基的發(fā)酵罐培養(yǎng)得到發(fā)酵液；

(3)巨大芽孢桿菌BMJBN02懸浮劑的制備：將制備的BMJBN02菌的發(fā)酵液與表面活性劑、防腐劑、懸浮助劑和增稠劑混合制備懸浮劑。

步驟(1)中液體LB培養(yǎng)基配方：1％NaCl，1％蛋白胨，0.5％酵母粉，pH7.0～7.5。

步驟(2)中培養(yǎng)條件為：培養(yǎng)溫度30℃，轉(zhuǎn)速220r/min，發(fā)酵時(shí)間為36～48h，發(fā)酵液PH維持在7.0，溶氧量30％，通氣量7～9m³/小時(shí)，罐壓0.05～0.1KPa，產(chǎn)孢率為88％，活菌計(jì)數(shù)5.33×10⁹CFU·mL^-1。