[發(fā)明專利]對血液中抑制劑具有增加的抗性的熱穩(wěn)定性A型DNA聚合酶突變體

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201510081106.3
• 申請日: 2015-02-13
• 公開（公告）號: CN104845950B
• 公開（公告）日: 2020-03-27
• 發(fā)明（設計）人: N·麥金尼;H·H·霍格雷非;J·福克斯;C·J·漢森;B·阿雷齊
• 申請（專利權）人: 安捷倫科技有限公司
• 主分類號: C12N9/12
• 分類號: C12N9/12;C12N15/54;C12Q1/6806
• 代理公司: 北京坤瑞律師事務所 11494
• 代理人: 封新琴

1.一種分離的突變體熱穩(wěn)定性A型DNA聚合酶，其由SEQ ID NO:11組成。

2.一種組合物，其包含(i)權利要求1的突變體聚合酶和(ii)一種或多種選自下組的試劑：含水緩沖液、二價金屬、延伸核苷酸、引物、去污劑、檢測劑、和靶核酸。

3.一種擴增靶核酸的方法，該方法包括：

提供疑似含有靶核酸的試驗樣品；

使所述試驗樣品與權利要求1的突變體聚合酶、與所述靶核酸特異性結合的引物、以及延伸核苷酸接觸而形成混合物，并且

在允許所述聚合酶利用所述靶核酸的序列作為用于摻入所述延伸核苷酸的模板來延伸所述引物的條件下溫育該混合物。

4.權利要求3的方法，其中所述方法具有以下一個或多個特征：(i)所述方法為PCR的方法，(ii)所述試驗樣品為血液樣品，并且(iii)所述混合物含有至少1％v/v的該血液樣品。

5.一種分離的核酸、載體、或宿主細胞，其包含編碼權利要求1的突變體聚合酶的核苷酸序列。

6.權利要求5的核酸、載體或宿主細胞，其中所述核苷酸序列為SEQ ID NO:12。

7.一種產(chǎn)生多肽的方法，所述方法包括在培養(yǎng)基中在允許由所述核酸編碼的多肽表達的條件下培養(yǎng)權利要求6的宿主細胞，并從經(jīng)培養(yǎng)的細胞或所述培養(yǎng)基純化所述多肽。

8.一種用于擴增靶核酸的試劑盒，所述試劑盒包含(i)權利要求1的突變體聚合酶和(ii)一種或多種選自下組的試劑：含水緩沖液、二價金屬、延伸核苷酸、引物、探針、去污劑、檢測劑、染料、熒光分子、抗凝劑、和細胞裂解劑。