[發(fā)明專利]一種自然殺傷細胞擴增的方法和一種培養(yǎng)基組合物

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201510080080.0
• 申請日: 2015-02-13
• 公開（公告）號: CN104673750B
• 公開（公告）日: 2018-04-27
• 發(fā)明（設計）人: 張強;張榮勝;李程;項春生
• 申請（專利權）人: 杭州易文賽生物技術有限公司
• 主分類號: C12N5/0783
• 分類號: C12N5/0783
• 代理公司: 北京英創(chuàng)嘉友知識產(chǎn)權代理事務所(普通合伙)11447
• 代理人: 王浩然,周建秋

1.一種自然殺傷細胞擴增的方法，其特征在于，該方法包括如下步驟：

(1)從全血中分離淋巴細胞，并將淋巴細胞接種在第一培養(yǎng)基中進行第一擴增培養(yǎng)，得到第一擴增培養(yǎng)產(chǎn)物；

(2)將所述第一擴增培養(yǎng)產(chǎn)物與第二培養(yǎng)基按1：(0.5-2)的體積比混合并進行第二擴增培養(yǎng)，得到第二擴增培養(yǎng)產(chǎn)物；

(3)將所述第二擴增培養(yǎng)產(chǎn)物替代第一擴增培養(yǎng)產(chǎn)物返回步驟(2)的操作并循環(huán)進行步驟(2)的操作2-7次；

其中，所述第一培養(yǎng)基含有基礎培養(yǎng)基和10-20mg/mL的L-谷氨酰胺、100-200IU/mL的硫酸慶大霉素、5-10μg/mL的甘露聚糖肽、600-800IU/mL的白介素2、10-20ng/mL的抗人CD16單抗和10-30ng/mL的白介素15；所述第二培養(yǎng)基含有10-20mg/mL的L-谷氨酰胺、100-200IU/mL的硫酸慶大霉素、5-10μg/mL的甘露聚糖肽、600-800IU/mL的白介素2和10-30ng/mL的白介素15；

其中，所述第一培養(yǎng)基還含有8-12體積％的血清，所述第二培養(yǎng)基還含有0.5-10體積％的血清；所述血清為從分離所述淋巴細胞所用的全血中分離得到的自體血清。

2.根據(jù)權利要求1所述的方法，其中，步驟(2)中所用的所述第二培養(yǎng)基還含有6-10體積％的血清；步驟(3)中所用的所述第二培養(yǎng)基還含有0.5-2體積％的血清。

3.根據(jù)權利要求1所述的方法，其中，所述第一擴增培養(yǎng)的時間為5-30小時，所述第二擴增培養(yǎng)的時間為50-100小時。

4.根據(jù)權利要求3所述的方法，其中，所述第一擴增培養(yǎng)和所述第二擴增培養(yǎng)各自獨立地在包括飽和濕度、36-38℃和4-6體積％的二氧化碳濃度的條件下進行。

5.根據(jù)權利要求1所述的方法，其中，從全血中分離所述淋巴細胞和所述自體血清的方法包括：將全血與18-22U/ml的肝素鈉生理鹽水溶液按(4-6)：1的體積比混合后離心得到血細胞和血漿；然后用淋巴細胞分離液從所述血細胞中分離得到淋巴細胞，并且將所述血漿在55-57℃下保持20-40分鐘后離心取得上清液。