[發(fā)明專利]一種基于COII基因的非洲乳白蟻熒光定量PCR分子檢測(cè)方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201510075573.5
• 申請(qǐng)日: 2015-02-12
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN104673909A
• 公開(kāi)（公告）日: 2015-06-03
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張衛(wèi)東;王嵐;權(quán)永兵;廖力;徐淼鋒;遲遠(yuǎn)麗;黃永輝
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 珠海出入境檢驗(yàn)檢疫局檢驗(yàn)檢疫技術(shù)中心
• 主分類號(hào): C12Q1/68
• 分類號(hào): C12Q1/68
• 代理公司: 廣州嘉權(quán)專利商標(biāo)事務(wù)所有限公司 44205
• 代理人: 譚志強(qiáng)

1.一種基于COII基因的非洲乳白蟻熒光定量PCR分子檢測(cè)方法，其特征在于，采用上游引物CS-F、下游引物CS-R、引物探針CS-TZ，其序列分別如下：

CS-F：5’-TCTCAATCACTCGTCCAGGCA-3’；

CS-R：5’-CTTTCGATTGTGATGGGCATGA-3’；

CS-TZ：5’-FAM-TATATACGGACAATGCTCAGAGATC-TAMRA-3’，其中FAM為熒光報(bào)告基團(tuán)，TRAMA為熒光淬滅基團(tuán)。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種基于COII基因的非洲乳白蟻熒光定量PCR分子檢測(cè)方法，其特征在于，還包括以下步驟：

1)提取基因組DNA制備模板；

2)將所述上游引物CS-F、所述下游引物CS-R和所述熒光探針CS-TZ置于熒光定量PCR儀中進(jìn)行實(shí)時(shí)定量熒光PCR擴(kuò)增反應(yīng)；

3)熒光PCR儀讀取Ct值判定檢測(cè)的結(jié)果。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種基于COII基因的非洲乳白蟻熒光定量PCR分子檢測(cè)方法，其特征在于，PCR反應(yīng)體系總體積為20μl，各成分組成如下：2×HS?Premix混合反應(yīng)液10μl，上下游引物各0.5μl，熒光探針0.25μl，模板2μl，加ddH₂O補(bǔ)足到20μl。

4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種基于COII基因的非洲乳白蟻熒光定量PCR分子檢測(cè)方法，其特征在于，進(jìn)行PCR擴(kuò)增的反應(yīng)條件為：95℃預(yù)變性，30s；95℃變性5s，60℃退火延伸30s，45個(gè)循環(huán)。

5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種基于COII基因的非洲乳白蟻熒光定量PCR分子檢測(cè)方法，其特征在于，所述上游引物CS-F和下游引物CS-R的使用濃度為0.1μmol/L～1.0μmol/L，所述引物探針CS-TZ的使用濃度為0.05μmol/L～0.5μmol/L。

6.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種基于COII基因的非洲乳白蟻熒光定量PCR分子檢測(cè)方法，其特征在于，引物探針組合方法的檢測(cè)靈敏度在1pg/μl。