[發明專利]一種基于COII基因的非洲乳白蟻熒光定量PCR分子檢測方法在審
| 申請號： | 201510075573.5 | 申請日： | 2015-02-12 |
| 公開（公告）號： | CN104673909A | 公開（公告）日： | 2015-06-03 |
| 發明（設計）人： | 張衛東;王嵐;權永兵;廖力;徐淼鋒;遲遠麗;黃永輝 | 申請（專利權）人： | 珠海出入境檢驗檢疫局檢驗檢疫技術中心 |
| 主分類號： | C12Q1/68 | 分類號： | C12Q1/68 |
| 代理公司： | 廣州嘉權專利商標事務所有限公司 44205 | 代理人： | 譚志強 |
| 地址： | 519015 廣*** | 國省代碼： | 廣東;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 基于 coii 基因 非洲 乳白 熒光 定量 pcr 分子 檢測 方法 | ||
1.一種基于COII基因的非洲乳白蟻熒光定量PCR分子檢測方法，其特征在于，采用上游引物CS-F、下游引物CS-R、引物探針CS-TZ，其序列分別如下：
CS-F：5’-TCTCAATCACTCGTCCAGGCA-3’；
CS-R：5’-CTTTCGATTGTGATGGGCATGA-3’；
CS-TZ：5’-FAM-TATATACGGACAATGCTCAGAGATC-TAMRA-3’，其中FAM為熒光報告基團，TRAMA為熒光淬滅基團。
2.根據權利要求1所述的一種基于COII基因的非洲乳白蟻熒光定量PCR分子檢測方法，其特征在于，還包括以下步驟：
1)提取基因組DNA制備模板；
2)將所述上游引物CS-F、所述下游引物CS-R和所述熒光探針CS-TZ置于熒光定量PCR儀中進行實時定量熒光PCR擴增反應；
3)熒光PCR儀讀取Ct值判定檢測的結果。
3.根據權利要求2所述的一種基于COII基因的非洲乳白蟻熒光定量PCR分子檢測方法，其特征在于，PCR反應體系總體積為20μl，各成分組成如下：2×HS?Premix混合反應液10μl，上下游引物各0.5μl，熒光探針0.25μl，模板2μl，加ddH2O補足到20μl。
4.根據權利要求2所述的一種基于COII基因的非洲乳白蟻熒光定量PCR分子檢測方法，其特征在于，進行PCR擴增的反應條件為：95℃預變性，30s；95℃變性5s，60℃退火延伸30s，45個循環。
5.根據權利要求2所述的一種基于COII基因的非洲乳白蟻熒光定量PCR分子檢測方法，其特征在于，所述上游引物CS-F和下游引物CS-R的使用濃度為0.1μmol/L～1.0μmol/L，所述引物探針CS-TZ的使用濃度為0.05μmol/L～0.5μmol/L。
6.根據權利要求2所述的一種基于COII基因的非洲乳白蟻熒光定量PCR分子檢測方法，其特征在于，引物探針組合方法的檢測靈敏度在1pg/μl。
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