[發(fā)明專利]一株分離自豆豉中產(chǎn)蛋白酶的解淀粉芽孢桿菌菌株

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201510073251.7
• 申請(qǐng)日: 2015-02-12
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN104694424B
• 公開(kāi)（公告）日: 2017-12-01
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王筱蘭;李保根;涂宗財(cái);楊林;楊慧林
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 江西師范大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N1/20
• 分類號(hào): C12N1/20;C12N9/54;C12R1/07
• 代理公司: 暫無(wú)信息
• 代理人: 暫無(wú)信息

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物工程技術(shù)領(lǐng)域，特別是涉及一種從傳統(tǒng)豆豉中分離純化的解淀粉芽孢桿菌菌株，該菌株對(duì)于本傳統(tǒng)豆豉工業(yè)實(shí)現(xiàn)科學(xué)化和的純種培養(yǎng)有著重要的意義。

背景技術(shù)

豆豉距今已有兩千多年歷史，具有很高營(yíng)養(yǎng)價(jià)值和驅(qū)寒健食等功效。過(guò)去西方學(xué)者認(rèn)為，枯草桿菌是一種危害甚大的腐敗菌。我國(guó)先民卻能化腐朽為神奇，最先用于食品釀造，由于細(xì)菌豆豉大都由家庭制作食用，古代文獻(xiàn)少有記載，近代學(xué)者也少有涉獵，反而國(guó)外研究較多。據(jù)近代研究枯草桿菌能形成大量淀粉酶和蛋白酶，已在工業(yè)生產(chǎn)上廣泛應(yīng)用。然而，在我國(guó)由于細(xì)菌型豆豉的工業(yè)發(fā)酵沿用傳統(tǒng)自然發(fā)酵方法，一直沒(méi)有實(shí)現(xiàn)純種發(fā)酵，傳統(tǒng)自然發(fā)酵過(guò)程中的微生物主要來(lái)自于空氣中和器具上的微生物，導(dǎo)致水豆豉產(chǎn)品的質(zhì)量不穩(wěn)定，產(chǎn)品的運(yùn)輸和保藏也受到限制很難實(shí)現(xiàn)大規(guī)模生產(chǎn)通常情況下，自然環(huán)境中存在的野生菌株發(fā)酵能力參差不齊、安全性較低；雖然在發(fā)酵過(guò)程主要產(chǎn)生有益菌，但在開(kāi)放的不可控的發(fā)酵體系中很可能存在一些有害菌，如何避免有害菌污染是一個(gè)至關(guān)重要的公共衛(wèi)生課題。為實(shí)現(xiàn)傳統(tǒng)豆豉的工業(yè)化生產(chǎn)，必須用純種發(fā)酵代替自然發(fā)酵。

基于以上原因，對(duì)自然發(fā)酵豆豉中有益微生物進(jìn)行分離和鑒定，組合對(duì)豆豉品質(zhì)起到至關(guān)重要的有益微生物，為豆豉工業(yè)化、可控化和標(biāo)準(zhǔn)化生產(chǎn)打下堅(jiān)實(shí)基礎(chǔ)。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一株從傳統(tǒng)豆豉中分離純化產(chǎn)蛋白酶的解淀粉芽孢桿菌菌株，可通過(guò)液態(tài)發(fā)酵生產(chǎn)蛋白酶。

本發(fā)明的從傳統(tǒng)豆豉中分離純化產(chǎn)蛋白酶的解淀粉芽孢桿菌菌株，其分類命名為解淀粉芽孢桿菌（Bacillus amyloliquefaciens），從傳統(tǒng)豆豉中分離純化技術(shù)分離獲得，已保藏于中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏日期為2014年12月10日，保藏號(hào)為：CCTCC M 2014639，保藏地址是中國(guó)武漢大學(xué)。

本發(fā)明所述的解淀粉芽孢桿菌（Bacillus amyloliquefaciens）固體培養(yǎng)特征為：

固體培養(yǎng)為肉湯培養(yǎng)基，37±1℃培養(yǎng)24h，菌落直徑8～12mm。呈白色不透明菌落，表面粗糙，菌落邊緣不規(guī)則，在多種培養(yǎng)基上均不產(chǎn)色素。

本發(fā)明所述的解淀粉芽孢桿菌的顯微形態(tài)特征為：

菌體呈短桿狀，染色均勻，具運(yùn)動(dòng)性，兼性厭氧，可形成內(nèi)生芽孢，芽孢囊膨大，呈橢圓形，游離芽孢表面著色弱，革蘭氏染色陽(yáng)性。

本發(fā)明所述的解淀粉芽孢桿菌的液體培養(yǎng)條件為：

培養(yǎng)基為酪素發(fā)酵培養(yǎng)基，搖瓶培養(yǎng)3天，培養(yǎng)溫度37±1℃，搖床轉(zhuǎn)速為170r/min。

發(fā)酵培養(yǎng)特征：培養(yǎng)第1天，發(fā)酵液變渾濁，培養(yǎng)第3天，發(fā)酵液顏色變深，數(shù)量變多，直徑變大。

解淀粉芽孢桿菌（Bacillus amyloliquefaciens）液體發(fā)酵3天后，對(duì)發(fā)酵液進(jìn)行化學(xué)提取、分離可得到中性蛋白酶。

本發(fā)明所述的解淀粉芽孢桿菌菌株的基因登錄號(hào)為KP419723，16S rDNA堿基序列為：