[發(fā)明專利]提取基因組DNA的試劑盒和提取方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201510072951.4
• 申請日: 2015-02-11
• 公開（公告）號: CN104630208B
• 公開（公告）日: 2018-01-02
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 林源吉;丁佳女;葉俊波;洪巧娟
• 申請（專利權(quán)）人: 杭州百邁生物股份有限公司
• 主分類號: C12N15/10
• 分類號: C12N15/10
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.提取基因組DNA的方法，包括以下步驟：

(1)采樣；

(2)裂解樣品細(xì)胞：加入65℃預(yù)熱的試劑1和Proteinase K，渦旋振蕩，混合均勻，65℃水浴0.5h-過夜；

(3)沉淀非DNA的雜質(zhì)：將步驟2中的混合物冷卻至室溫，加入試劑2，混合均勻，冰浴；

(4)離心步驟3所得混合物，取上清，加入Carrier RNA和試劑3，混合均勻后加入異丙醇，混勻；

(5)將步驟4所得混合物中的DNA與純化載體結(jié)合，經(jīng)過洗滌液的去蛋白洗滌和去鹽洗滌，以及洗脫液的洗脫步驟，獲得可用于檢測的樣本基因組DNA；

其中，所述的試劑1包括以下組分：0.1％-5％的十六烷基三甲基溴化銨(質(zhì)量百分比)、10mM-200mM的Tris、10mM-200mM EDTA、0.1％-10％的PVP(質(zhì)量百分比)、0.1M-5M的NaCl、溶劑為去離子水；試劑2包括以下組分：0.1M-6.5M的鹽酸胍、1％-50％的乙醇(體積百分比)、0.1M-2M的檸檬酸鈉、溶劑為去離子水；試劑3包括以下組分：0.1M-8M的鹽酸胍、0.05M-0.2M的甘氨酸、溶劑為去離子水。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，其中步驟4所述的純化載體選自核酸提取純化柱或磁珠。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟2中65℃水浴時(shí)間為0.5h-2h。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，在步驟3冰浴時(shí)間為10min。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，試劑1的pH值為4.5-8.5，試劑2的pH值為3.3-7.5，試劑3的pH值為2.5-8.0。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述的試劑1包括以下組分：3.5％的十六烷基三甲基溴化銨、120mM的Tris、110mM的EDTA、6％的PVP、3M的NaCl、溶劑為去離子水；試劑2包括以下組分：2.5M的鹽酸胍、25％的乙醇、1M的檸檬酸鈉、溶劑為去離子水；試劑3包括以下組分：4M的鹽酸胍、0.1M的甘氨酸、溶劑為去離子水。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述的洗滌液包括去蛋白洗滌液和去鹽洗滌液。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其特征在于，所述去蛋白洗滌液包括1M-6M的鹽酸胍，1mM-50mM的EDTA·2Na·2H₂O，溶劑為去離子水；所述去鹽洗滌液包括20mM-200mM的NaAC·3H₂O，溶劑為去離子水；洗脫液為去離子水。