[發(fā)明專利]大黃魚白細胞介素8基因大腸桿菌表達產(chǎn)物及制備與應用在審
| 申請?zhí)枺?/td> | 201510069252.4 | 申請日： | 2015-02-10 |
| 公開（公告）號： | CN104611287A | 公開（公告）日： | 2015-05-13 |
| 發(fā)明（設計）人： | 陳新華;母尹楠;敖敬群 | 申請（專利權(quán)）人： | 國家海洋局第三海洋研究所 |
| 主分類號： | C12N1/21 | 分類號： | C12N1/21;C07K14/54;C12N15/24;C12N15/70;C07K1/22;A61K38/20;A61P37/04;C12R1/19 |
| 代理公司： | 廈門南強之路專利事務所(普通合伙) 35200 | 代理人： | 馬應森 |
| 地址： | 361005 福*** | 國省代碼： | 福建;35 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 大黃魚 白細胞 基因 大腸桿菌 表達 產(chǎn)物 制備 應用 | ||
技術領域
本發(fā)明涉及大黃魚白細胞介素8(IL-8)基因，尤其是涉及一種大黃魚白細胞介素8基因大腸桿菌表達產(chǎn)物及其制備方法與應用。
背景技術
趨化因子屬于細胞因子家族，在炎癥反應或正常生理條件下調(diào)控免疫細胞的遷移，調(diào)控所富集細胞的免疫反應和分化，是先天性免疫和獲得性免疫反應之間的橋梁(Esche?C,Stellato?C,Beck?LA.Chemokines:key?players?in?innate?and?adaptive?immunity[J].J?Invest?Dermatol,2005,125(4):615-628)。趨化因子還可以調(diào)控免疫細胞在淋巴器官間的定位和分化、血管生成、神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育、器官生成以及生殖細胞遷移等(DeVries?ME,Kelvin?AA,Xu?L,Ran?L,Robinson?J,Kelvin?DJ.Defining?the?origins?and?evolution?of?the?chemokine/chemokine?receptor?system[J].J?Immunol,2006,176(1):401-415)。根據(jù)前兩個保守的半胱氨酸殘基的排列將趨化因子分為四個亞家族：CXC型、CC型、CX3C型和C型。
白細胞介素8(Interleukin-8，IL-8)屬于CXC型趨化因子，是魚類中功能試驗進展較多的一個趨化因子。IL-8不僅可以趨化嗜中性粒細胞、嗜堿性粒細胞、靜息T細胞和刺激后的嗜酸性粒細胞，而且可以通過誘導呼吸爆發(fā)、胞吐等作用活化這些細胞(van?der?Aa?LM,Chadzinska?M,Tijhaar?E,Boudinot?P,Verburg-van?Kemenade?BM.CXCL8chemokines?in?teleost?fish:two?lineages?with?distinct?expression?profiles?during?early?phases?of?inflammation[J].PloS?one.2010，5:e12384)。虹鱒的IL-8重組蛋白體外可以趨化中性粒細胞，并且像哺乳動物一樣，并能引起目的細胞呼吸爆發(fā)反應(Harun?NO,Zou?J,Zhang?YA,Nie?P,Secombes?CJ.The?biological?effects?of?rainbow?trout(Oncorhynchus?mykiss)recombinant?interleukin-8[J].Dev?Comp?Immunol,2008,32(6):673-681)。此外，IL-8還可以誘導CC型趨化因子如CK-6以及促炎癥因子IL-1β、TNF-α的表達。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的第一目的在于提供可高效表達大黃魚白細胞介素8基因的大腸桿菌工程菌。
本發(fā)明的第二目的在于提供大黃魚白細胞介素8基因大腸桿菌表達產(chǎn)物及其制備方法。
本發(fā)明的第三目的在于提供大黃魚白細胞介素8重組蛋白的應用。
所述可高效表達大黃魚白細胞介素8基因的大腸桿菌工程菌為大腸桿菌(Escherichia?coli)BL21/pET-His-IL-8，已于2015年1月21日保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏中心的地址為中國，武漢，武漢大學，郵編：430072，保藏編號為CCTCC?NO：M?2015053。
所述大黃魚白細胞介素8基因大腸桿菌表達產(chǎn)物為分子量約10kDa(kilodalton，千道爾頓)的大黃魚IL-8重組蛋白，該大黃魚IL-8重組蛋白在終濃度為100μg/mL時，對大黃魚外周血白細胞具有較為明顯的趨化作用，并具有誘導大黃魚外周血白細胞產(chǎn)生呼吸爆發(fā)的活性，顯示出其在水產(chǎn)免疫增強劑研發(fā)中的良好應用前景。
所述大黃魚白細胞介素8基因的cDNA序列及推斷的氨基酸序列如下：
其中，下劃線部分為預測的大黃魚IL-8信號肽；陰影部分標示推斷的大黃魚IL-8成熟肽序列；星號表示終止密碼子。
所述大黃魚白細胞介素8基因大腸桿菌表達產(chǎn)物的制備方法，包括以下步驟：
1)克隆大黃魚IL-8基因全長cDNA序列，再采用PCR技術擴增出編碼第23～99位氨基酸的大黃魚IL-8成熟肽基因片段；
2)將步驟1)得到的大黃魚IL-8成熟肽基因片段克隆到大腸桿菌表達載體pET-His，得到含大黃魚IL-8基因片段的重組表達載體pET-His-IL-8；
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