[發明專利]一種金屬離子固定化親和磁球的制備方法及應用

在審

• 申請號: 201510069196.4
• 申請日: 2015-02-02
• 公開（公告）號: CN104667899A
• 公開（公告）日: 2015-06-03
• 發明（設計）人: 張維冰;張磊;陳雅靜;高小迪;張凌怡
• 申請（專利權）人: 華東理工大學
• 主分類號: B01J20/286
• 分類號: B01J20/286;B01J20/30;G01N1/40
• 代理公司: 無
• 代理人: 無

1.一種金屬離子固定化親和磁球的制備方法，其特征在于，其具體步驟為：

第一、2.0～3.0g的三氯化鐵和90～110mL的乙二醇和7.0～7.5g的無水乙酸鈉進行均勻混合，在150～250℃進行高溫水解反應，得到四氧化三鐵磁球；

第二、將200～250mg四氧化三鐵磁球分散在體積比為1∶4～1∶6的乙醇和水的混合溶液中，逐滴加入0.3～0.5mL的3-(三甲氧基甲硅烷基)丙基甲基丙烯酸酯機械攪拌1～2天，得到聚合物包裹的磁球；

第三、將步驟二中得的聚合物包裹的磁球分散在40～50mL的乙腈中，加入200μL的烯丙基氯單體和300～350μL二甲基丙烯酸乙二醇酯的交聯劑及10～15mg偶氮二異丁腈引發劑于90～100℃進行回流反應，得到以具有以四氧化三鐵為核，雙層有機聚合物包裹的核-殼-殼結構的磁球；

第四、將步驟三中得的雙層有機聚合物包裹的核-殼-殼結構的磁球分散在40～50mL的1∶1～1∶5的三氯甲烷與三乙胺的混合溶液中，加入200～300mg的亞氨基乙二酸于70～90℃進行回流反應，得到以亞氨基乙二酸進行結構修飾的磁球；

第五、將步驟四中得到的亞氨基乙二酸進行結構修飾的磁球加入含有0.05～2mol/L的可溶性銅、鎳、鈦離子溶液中，用氫氧化鈉溶液將溶液pH值調整為6～9，在室溫下實現金屬離子的固定化，得到螯合金屬離子的磁性微球。

2.一種特異性多肽或者蛋白的富集檢測方法，其特征在于，其具體步驟為：

(1)將制得的螯合金屬離子的磁球用水溶液進行清洗1～3次，去除游離的金屬離子；

(2)將步驟(1)清洗后的螯合金屬離子的磁球與0.4～0.6mg/L蛋白質溶液進行混合1～2h，利用磁分離對與金屬離子特異性作用的多肽或者蛋白進行選擇性富集和快速分離，實現對高豐度的多肽或蛋白進行去除和低豐度的多肽或蛋白的富集；

(3)將步驟(2)中吸附多肽或蛋白的磁球用0.2～0.4g/mL的咪唑溶液進行洗脫，用于檢測。