[發(fā)明專(zhuān)利]一種將hpalXoo基因轉(zhuǎn)入短短芽孢桿菌HAB-5的化學(xué)轉(zhuǎn)化方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201510065645.8
• 申請(qǐng)日: 2015-02-09
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN104762326A
• 公開(kāi)（公告）日: 2015-07-08
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 繆衛(wèi)國(guó);汪惠;劉文波;政服叢
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 海南大學(xué)
• 主分類(lèi)號(hào): C12N15/87
• 分類(lèi)號(hào): C12N15/87;C12N15/31;C12R1/01
• 代理公司: 深圳市千納專(zhuān)利代理有限公司 44218
• 代理人: 徐慶蓮

1.一種將基因hpa1_Xoo轉(zhuǎn)入短短芽孢桿菌HAB-5的化學(xué)轉(zhuǎn)化方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)將短短芽孢桿菌HAB-5在LB平板上活化，挑取單菌落接種于LB液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)得短短芽孢桿菌HAB-5菌液；

(2)轉(zhuǎn)接經(jīng)步驟(1)培養(yǎng)的菌液到MD培養(yǎng)基中培養(yǎng)；

(3)離心后倒去上清液，剩余懸浮菌體即得HAB-5懸浮菌體溶液；

(4)HAB-5懸浮菌體溶液加入hpa1_Xoo得混合菌液，200-250rpm振蕩培養(yǎng)；

(5)加入混合菌液體積10倍的LB，200-250rpm振蕩恢復(fù)培養(yǎng)；

(6)離心后除去上清液，即得含有hpa1_Xoo基因的HAB-5。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的所述的一種將基因hpa1_Xoo轉(zhuǎn)入短短芽孢桿菌HAB-5的化學(xué)轉(zhuǎn)化方法，其特征在于：所述步驟(1)培養(yǎng)條件為，27-29℃振蕩160-180rpm培養(yǎng)12-16個(gè)小時(shí)。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的所述的一種將基因hpa1_Xoo轉(zhuǎn)入短短芽孢桿菌HAB-5的化學(xué)轉(zhuǎn)化方法，其特征在于：所述步驟(2)培養(yǎng)條件為，27-29℃振蕩160-180rpm培養(yǎng)3-5h。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的所述的一種將基因hpa1_Xoo轉(zhuǎn)入短短芽孢桿菌HAB-5的化學(xué)轉(zhuǎn)化方法，其特征在于：所述步驟(2)中MD培養(yǎng)基每10mL中含有以下組分：10×PC緩沖液0.92mL，50％葡萄糖0.1mL(115℃滅菌30min)，5mg/mL-色氨酸0.1mL，2.2mg/mL檸檬酸鐵銨0.005mL，0.5mol/L天門(mén)冬氨酸鉀0.24mL，1mol/L硫酸鎂0.03mL。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的所述的一種將基因hpa1_Xoo轉(zhuǎn)入短短芽孢桿菌HAB-5的化學(xué)轉(zhuǎn)化方法，其特征在于：所述的10×PC緩沖液各組分的摩爾濃度為：磷酸二氫鉀44mmol/L，磷酸氫二鉀60mmol/L，檸檬酸三鈉30mmol/L。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的所述的一種將基因hpa1_Xoo轉(zhuǎn)入短短芽孢桿菌HAB-5的化學(xué)轉(zhuǎn)化方法，其特征在于：所述步驟(3)中離心條件為，8000-10000rpm，離心8-12min。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的所述的一種將基因hpa1_Xoo轉(zhuǎn)入短短芽孢桿菌HAB-5的化學(xué)轉(zhuǎn)化方法，其特征在于：所述步驟(4)中hpa1_xoo的加入量為每毫升懸浮菌體溶液加入0.5-0.8ug的hpa1_xoo；振蕩培養(yǎng)條件為溫度27-29℃、培養(yǎng)2-3h。

8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的所述的一種將基因hpa1_Xoo轉(zhuǎn)入短短芽孢桿菌HAB-5的化學(xué)轉(zhuǎn)化方法，其特征在于：所述步驟(5)中恢復(fù)培養(yǎng)過(guò)程中，控制溫度27-29℃，培養(yǎng)培養(yǎng)時(shí)間為2-3h。

9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的所述的一種將基因hpa1_Xoo轉(zhuǎn)入短短芽孢桿菌HAB-5的化學(xué)轉(zhuǎn)化方法，其特征在于：所述步驟(6)離心條件為8000-10000rpm離心10-12min。