[發(fā)明專利]一種利用紫菜蛋白制備的抗氧化多肽

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201510060850.5
• 申請日: 2015-02-05
• 公開（公告）號: CN104650191B
• 公開（公告）日: 2018-03-27
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 詹照強(qiáng);汪少蕓;詹照雅;全漢鋒;劉賢漢;王興春
• 申請（專利權(quán)）人: 福建申石藍(lán)食品有限公司
• 主分類號: C07K7/08
• 分類號: C07K7/08;C07K1/36;C07K1/34;C07K1/16;C07K1/20;C12P21/06
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技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及食品生物技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及一種利用紫菜蛋白制備的抗氧化多肽。

背景技術(shù)

食品營養(yǎng)成分的氧化會產(chǎn)生過氧化物，其不僅會影響食品的營養(yǎng)價值，引起食品品質(zhì)下降，嚴(yán)重的甚至還會導(dǎo)致攝入者的身體發(fā)生疾病。因此，尋找安全的抗氧化劑以抑制過氧化物產(chǎn)生一直是生化營養(yǎng)學(xué)的研究熱點。由于化學(xué)合成抗氧化劑比天然抗氧化劑具有更好的效果和更便宜的價格，因此其已經(jīng)被廣泛應(yīng)用于食品行業(yè)中。但是，目前有研究發(fā)現(xiàn)合成抗氧化劑對人體肝、脾、肺等器官具有蓄積性致癌作用，從而引起了人們對其安全性的擔(dān)憂，并且開始逐漸限制其在食品中的使用。于是人們把目光轉(zhuǎn)向天然抗氧化劑。α-生育酚是一種被最普遍使用的天然抗氧化劑，它能有效保持食品中油脂的穩(wěn)定性，但是卻不利于食品保存。因此，我們有必要尋找一種其它來源的安全的天然抗氧化劑。多肽是分子結(jié)構(gòu)介于氨基酸和蛋白質(zhì)之間的一類化合物，使蛋白質(zhì)具有一定的生理功能。在人類的生命活動中，肽在體內(nèi)的消化吸收優(yōu)于游離的氨基酸，且有著區(qū)別于氨基酸的體內(nèi)輸送體系。研究發(fā)現(xiàn)，很多不同來源的多肽都具有抗氧化能力，如水解酪蛋白、大豆蛋白、牛血清白蛋白、卵白蛋白、油料種子蛋白、小麥醇溶蛋白和玉米蛋白等得到的多肽都具有一定的抗氧化性。

我國擁有豐富的紫菜資源，但是由于資源利用率低，加工過程產(chǎn)生的下腳料浪費(fèi)等原因造成資源浪費(fèi)，甚至是環(huán)境污染。紫菜中含有大量蛋白質(zhì)，且其組成均衡，利用現(xiàn)代生物技術(shù)對蛋白質(zhì)資源進(jìn)行深加工，合理的選用酶類等，通過工藝優(yōu)化生物活性肽的產(chǎn)品得率將使得生物活性肽的研究具有更廣闊的前景。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明提供了一種利用紫菜蛋白制備的抗氧化多肽，使抗氧化活性得以高效地實現(xiàn)。

本發(fā)明是通過如下技術(shù)方案實現(xiàn)的：

本發(fā)明的一種利用紫菜蛋白制備的抗氧化多肽，氨基酸序列為aingr yqraaaslga arsl。

本發(fā)明還提供了一種利用紫菜蛋白制備的抗氧化多肽的制備方法，以紫菜為原料提取蛋白，然后采用堿性蛋白酶對其進(jìn)行酶解，分離純化、冷凍干燥得到抗氧化多肽；所述酶解條件為：pH為8.0、溫度45℃、酶解時間為7h、酶-底物配比為3000U/g；所述酶為堿性蛋白酶。所述分離純化的手段包括超濾、SP-Sephadex C-25離子交換色譜、Sephadex G 50分子篩和RP-HPLC反相高效液相色譜。

所述分離純化的具體步驟為：

(1)酶解產(chǎn)物首先利用分子量截留范圍為10000Da和5000Da的超濾膜對酶解產(chǎn)物進(jìn)行超濾分離，將其分為3個分子量范圍不同的組分，分別為分子量大于10000Da的組分、分子量介于10000Da和5000Da的組分、分子量小于5000Da的組分；(2)收集具有最佳抗氧化活性的組分，再用SP-Sephadex C-25陽離子交換色譜進(jìn)行分離，上樣后洗去未吸附組分，再以含0～0.35mol/L NaCl的0.02mol/L、pH8.0Tris－鹽酸緩沖液進(jìn)行線性梯度洗脫，流速為0.5ml/min，在225nm下進(jìn)行測量，測定各吸收峰對應(yīng)的洗脫組分的抗氧化活性；(3)收集具有最佳抗氧化活性的峰，再用Sephadex G-50凝膠色譜進(jìn)行分離，洗脫液為去離子水，流速為0.5ml/min，在225nm下進(jìn)行測量，測定各吸收峰對應(yīng)的洗脫組分的抗氧化活性；(4)收集具有最佳抗氧化活性的峰，再利RP-HPLC反相高效液相色譜進(jìn)行進(jìn)一步的分離，將分離出來的最好的抗氧化活性組分利用RP-HPLC反相高效液相色譜進(jìn)行再進(jìn)一步的分離，所用色譜柱為Gemini 5μC18，上樣量為100μL，流速為1mL/min，檢測波長為225nm。洗脫液自含體積分?jǐn)?shù)為10％乙腈和90％水(v/v)的混合液開始，至體積分?jǐn)?shù)為90％乙腈和10％水(v/v)的混合液結(jié)束，進(jìn)行梯度洗脫，收集體積分?jǐn)?shù)為24％乙腈和76％水(v/v)處的洗脫峰,得到本發(fā)明的高純度的抗氧化多肽。利用蛋白質(zhì)固相序列分析儀鑒定多肽的氨基酸序列，得到本發(fā)明的抗氧化多肽的氨基酸序列為：aingr yqraaaslga arsl。

為了實現(xiàn)上述方案，本發(fā)明采取的具體步驟如下：

(1)紫菜蛋白的提取

本發(fā)明所采用的紫菜蛋白為異樣發(fā)酵獲得。

紫菜蛋白質(zhì)提取工藝條件為：將紫菜清洗3-5次，超聲波破碎，浸提。浸提pH為8.0，料液比為20:1(重量比)。浸提時間6h，離心10000g 20分鐘，收集上清液，經(jīng)過濾、濃縮和冷凍干燥后得到紫菜蛋白。

(2)紫菜蛋白的酶解

酶購自上海生物試劑公司(中國·上海)。