[發(fā)明專利]一種類條紋鱸抗菌肽sb-M1-4

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201510060610.5
• 申請日: 2015-02-04
• 公開（公告）號: CN108059682A
• 公開（公告）日: 2018-05-22
• 發(fā)明（設計）人: 梁東;張廣獻;詹朝宇;劉瑞蘭
• 申請（專利權）人: 廣東中大南海海洋生物技術工程中心有限公司
• 主分類號: C07K19/00
• 分類號: C07K19/00;C07K1/06;C07K1/04;A61P31/04
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發(fā)明涉及一種包含抗菌肽sb-Moronecidin(后簡寫為sb-M)保守區(qū)域IVHVGKTI-NH2的序列，我們在具有很好的抗菌活性的抗菌肽sb-M原有序列的基礎上，進行人工改造設計，根據(jù)同源性比對，分析出保守序列IVHVGKTI。與hypothetical protein的保守序列KLIHRLVT進行雜合，設計，最終獲得序列：FGLHIFKGLVHVGKTIHKLITG。本發(fā)明的有益效果是：本發(fā)明所述的抗菌肽，具有高效廣譜抑菌作用，低毒性。可作為抗生素替代品使用。

專利申請?zhí)枺?/p>

技術領域：本發(fā)明為一種類條紋鱸抗菌肽sb-M1-4。

背景技術：近年來隨著抗生素的濫用，抗藥菌越來越多，耐藥性日益嚴重。據(jù)資料顯示，在美國臨床上分離到的金葡菌有95％對青霉素耐藥，50％以上對甲氧西林耐藥(Frindkin SK，Gaynes RP.Antimicrobial resistance in intensive care units.Clin Chest Med.1999，20(2)：303-316)；2012年我國臨床檢測發(fā)現(xiàn)，金葡菌和凝固酶陰性葡萄球菌中甲氧西林耐藥株(MRSA和MRCNS)的檢出率平均分別為47.9％和77.1％(2012年中國CHINET細菌耐藥性監(jiān)測Chin J Infect Chemother，2013，13(5)：321-330)。這種情況逐漸嚴重威脅著人類的生產生活，從而導致人們對此潛在威脅意識的覺醒及食品安全級別意識的提高，產生了替代舊抗生素且綠色環(huán)保、安全抗耐藥的新一代抗生素的迫切需要。

抗菌肽是生物體內免疫防御系統(tǒng)的重要組成部分，是一類小分子肽，被稱為安全的天然抗生素，具有抗菌譜廣、無耐藥性、熱穩(wěn)定好、水溶性高、無毒無殘留等優(yōu)點。據(jù)統(tǒng)計，目前我國尚有多達20種人畜共用或畜禽專用的抗生素作飼料添加劑，除此之外，抗菌肽還被并將被廣泛用于化妝品、食品保鮮劑、藥物、轉基因表達等與人類生產生活當中。將抗菌肽產品開發(fā)成新的代替?zhèn)鹘y(tǒng)抗生素的產品，將給我國的相關行業(yè)注入一針強心劑，推動我國相關行業(yè)不斷向前發(fā)展。

抗菌肽sb-M1-4序列：FGLHIFKGLVHVGKTIHKLITG；分子式：C116H187N31O25，分子量MW[AV]：2415.9；不含有稀有氨基酸和外源化學成分，具有免疫原性小、水溶性好、廣譜殺菌等優(yōu)點，能耐受胃腸道中蛋白酶及肽酶的降解。特別是在酸性條件下，加熱甚至是高溫高壓處理對其抗菌活性沒有影響。可以在產品保存過程中持續(xù)發(fā)揮其功能，保持產品品質，延長貯存期限。sb-M1-4可以作為新一代的添加劑，是很好的傳統(tǒng)抗生素替代品，能有效得解決人和動物藥殘和病原菌耐藥性的問題。

發(fā)明內容：本發(fā)明的目的在于提供一種人工構建的抗菌肽序列。我們在具有很好的抗菌活性的抗菌肽sb-M原有序列的基礎上，我們對其進行人工改造設計，根據(jù)同源性比對，分析出保守序列IVHVGKTI。與抗菌肽hypothetical protein的保守序列KLIHRLVT進行雜合，設計出十種人工抗菌肽，通過篩選，最終獲得序列：FGLHIFKGLVHVGKTIHKLITG。

本發(fā)明的方法包括如下步驟：

步驟(1)本發(fā)明利用生物信息學方法對抗菌體sb-M進行BLAST比對，分析并選出保守區(qū)域P1：IVHVGKTI

步驟(2)選擇與其功能相近的抗菌肽hypothetical protein的保守區(qū)域P2：KLIHRLVT，與sb-M1進行雜合設計；

步驟(3)采用化學合成法合成sb-M1系列抗菌肽十組；

步驟(4)采用平板培養(yǎng)法對合成抗菌肽sb-M1系列設計抗菌肽進行篩選，并對效果明顯的抗菌肽進行對金黃色葡萄球菌、大腸桿菌DH5α、沙門氏菌、動物致病大腸桿菌和醫(yī)院臨床病例分離的大腸埃希菌、溶血葡萄球菌的抗菌實驗如圖1所示，結果顯示抗菌肽sb-M1-4對以上各菌均有良好的抗菌活性。