[發(fā)明專利]一種類條紋鱸抗菌肽sb-M1-4

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201510060610.5
• 申請日: 2015-02-04
• 公開（公告）號: CN108059682A
• 公開（公告）日: 2018-05-22
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 梁東;張廣獻(xiàn);詹朝宇;劉瑞蘭
• 申請（專利權(quán)）人: 廣東中大南海海洋生物技術(shù)工程中心有限公司
• 主分類號: C07K19/00
• 分類號: C07K19/00;C07K1/06;C07K1/04;A61P31/04
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種類條紋鱸抗菌肽sb-Ml-4的化學(xué)合成方法及部分抗菌譜功能，主要包括以下步驟：

1)以Fmoc-氨基樹脂為載體，按照固相合成的方法依次連接具有保護(hù)基團(tuán)的氨基酸，獲得sb-Ml-4-氨基樹脂，期間依次脫除Fmoc保護(hù)基團(tuán)；

2)用三氟乙酸混合溶液把肽從樹脂上切下，處理干燥得粗品；

3)粗品過G10柱純化，濃縮干燥獲得成品；

4)測定人工合成的抗菌肽sb-Ml-4的抗菌譜；

5)測定人工合成的抗菌肽sb-Ml-4的最小抑菌濃度(MIC)。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述方法，其特征是：固相合成連接氨基酸過程中，F(xiàn)moc保護(hù)基團(tuán)脫除劑用20％哌啶/DMF，F(xiàn)moc-AA按縮合量的2-5倍量加入，其中Fmoc-AA、縮合劑比例按摩爾比1∶1投放，縮合反應(yīng)每次2-4小時。

3.根據(jù)權(quán)利要求1和2所述方法，其特征是：在氨基酸連接過程中，每一步氨基酸縮合均采用Kaise Test檢測反應(yīng)是否縮合完全，如顯色反應(yīng)呈陽性重復(fù)縮合該氨基酸。

4.根據(jù)權(quán)利要求1和2所述方法，其特征是：縮合劑體系采用DIC+A或A+B+C，其中A為HOBt或HOAt，B為HBTU、HATU、PyBOP或TBTU，C為DIPEA或TMP，可以采用排列組合的方式相互組合。

5.根據(jù)權(quán)利要求1中2)所述方法，其特征是：三氟乙酸混合溶液為TFA∶Tis∶Phenol按體積比95∶2.5∶2.5，反應(yīng)時間為3-4小時。

6.根據(jù)權(quán)利要求1中2)所述方法，其特征是：處理干燥是指切割液濃縮或吹至干后用冰乙醚析出固體，離心干燥。

7.根據(jù)權(quán)利要求1中3)所述方法，其特征是：用1％的醋酸溶液處理sb-Ml-4粗品，離心取上清過G10柱。

8.根據(jù)權(quán)利要求1中3)所述方法，其特征是：收集的sb-Ml-4過柱液經(jīng)濃縮后干燥。

9.根據(jù)權(quán)利要求1中4)所述內(nèi)容，其特征是：用平板培養(yǎng)法表明人工合成的sb-Ml-4對金黃色葡萄球菌、大腸桿菌K12D31、大腸桿菌DH5α、沙門氏菌、動物致病大腸桿菌和醫(yī)院臨床病例分離的大腸埃希菌、尿腸球菌、溶血葡萄球菌均有良好的抗菌活性。

10.根據(jù)權(quán)利要求1中5)所述內(nèi)容，其特征是：采用倍比稀釋的方法配制不同濃度的sb-Ml-4溶液，加入到培養(yǎng)菌液中培養(yǎng)16h后測OD630值，確定人工合成sb-Ml-4對不同菌株的最小抑菌濃度MIC。