[發(fā)明專利]一種具有抑制神經(jīng)細(xì)胞凋亡作用的金納米粒復(fù)合物及其應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201510060179.4
• 申請(qǐng)日: 2015-02-05
• 公開（公告）號(hào): CN104667297B
• 公開（公告）日: 2017-12-29
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 關(guān)燕清;陳曉輝
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 華南師范大學(xué)
• 主分類號(hào): A61K48/00
• 分類號(hào): A61K48/00;A61K38/18;A61K9/14;A61K47/02;A61K47/36;A61P25/28;A61P25/16
• 代理公司: 廣州粵高專利商標(biāo)代理有限公司44102
• 代理人: 陳衛(wèi)

1.一種具有抑制神經(jīng)細(xì)胞凋亡作用的金納米粒復(fù)合物的制備方法，其特征在于，步驟如下：

S1.制備殼聚糖/金納米粒復(fù)合物

S11.按照冰醋酸：巰基化殼聚糖=20～25：1的質(zhì)量比例，將冰醋酸加到巰基化殼聚糖中，然后加入15～20倍體積的超純水；

S12.按照巰基化殼聚糖：HAuCl₄·3H₂O=1：2～4的質(zhì)量比例，將HAuCl₄·3H₂O加入S11得到的混合液中；

S13.再按照HAuCl₄·3H₂O：NaBH₄=1：1～3的摩爾比例， 將NaBH₄加入到S12得到的混合液中進(jìn)行反應(yīng)，對(duì)反應(yīng)液進(jìn)行透析，得到CTS@GNP水溶液；

S2.制備神經(jīng)生長(zhǎng)因子（NGF）/質(zhì)粒DNA（pDNA）/殼聚糖/金納米粒復(fù)合物

S21.將帶負(fù)電荷的pDNA與帶正電荷的殼聚糖/金納米粒復(fù)合物按4～1：1～2質(zhì)量比混合，然后在4℃或者常溫下孵育20～30min，獲得CTS@GNP-pDNA；

S22.按照NGF：二甲基甲酰胺（DMF）：疊氮苯胺鹽酸鹽（AAH）=3：20：5～8的體積比，將NGF溶解在二甲基甲酰胺PBS溶液中，在避光下加入疊氮苯胺鹽酸鹽，冰浴中攪拌反應(yīng)24～48h；然后用超濾管對(duì)反應(yīng)產(chǎn)物進(jìn)行純化后，加入PBS溶解，得到NGF-AAH；

S23.將CTS@GNP-pDNA與NGF-AAH的混合物在紫外燈下反應(yīng)5～20s，并用超濾管對(duì)產(chǎn)物進(jìn)行純化，得到神經(jīng)生長(zhǎng)因子/質(zhì)粒DNA/殼聚糖/金納米粒復(fù)合物，即所述的具有抑制神經(jīng)細(xì)胞凋亡作用的金納米粒復(fù)合物；

步驟S21所述帶負(fù)電荷的pDNA為能夠干擾α-突觸核蛋白合成的pDNA。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述制備方法，其特征在于，步驟S22所述二甲基甲酰胺PBS溶液中PBS：DMF =1：4。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述制備方法，其特征在于，步驟S11所述巰基化殼聚糖的制備方法為：

（1）按照4mg/mL的比例，將殼聚糖溶解在冰醋酸與四氫呋喃的混合液中；

（2）在攪拌的情況下，按照殼聚糖：二硫雙琥珀酰亞胺基丙酸酯=1～2：1的比例，將含有二硫雙琥珀酰亞胺基丙酸酯的四氫呋喃溶液滴加進(jìn)步驟（1）的混合液中，反應(yīng)20～48h后，蒸干溶劑，得到產(chǎn)物；

（3）將產(chǎn)物懸浮在水中，加入2-巰基乙醇，攪拌2h，過(guò)濾，濾液用透析袋透析，得到巰基化殼聚糖。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述制備方法，其特征在于，步驟（1）所述冰醋酸與四氫呋喃的混合液中冰醋酸：四氫呋喃=4：1；

步驟（2）所述含有二硫雙琥珀酰亞胺基丙酸酯的四氫呋喃溶液中二硫雙琥珀酰亞胺基丙酸酯：四氫呋喃=10mg：1mL；

步驟（3）所述的水：2-巰基乙醇=15：1。

5.根據(jù)權(quán)利要求3所述制備方法，其特征在于，所述二硫雙琥珀酰亞胺基丙酸酯的制備方法為：

（1）在冰浴下，按照3,3’-二硫代二丙酸：N-羥基丁二酰亞胺：二甲基甲酰胺=2：4：25的摩爾比例，將3,3’-二硫代二丙酸和N-羥基丁二酰亞胺溶解在二甲基甲酰胺中；

（2）按照2：25的摩爾比例，將二環(huán)己基碳二亞胺溶解在二甲基甲酰胺中，攪拌下，將其滴加到步驟（1）的反應(yīng)混合物中，冰浴中反應(yīng)24h后，過(guò)濾；然后用乙酸乙酯稀釋，加入稀鹽酸，除去剩余的二環(huán)基脲，然后蒸發(fā)除去溶劑，得到固體產(chǎn)物；

（3）用稀鹽酸洗3～5次，然后加入乙酸乙酯，除去鹽酸水溶液，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去溶劑得到產(chǎn)物，即為二硫雙琥珀酰亞胺基丙酸酯。

6.權(quán)利要求1～5任一所述方法制備得到的具有抑制神經(jīng)細(xì)胞凋亡作用的金納米粒復(fù)合物。

7.權(quán)利要求6所述具有抑制神經(jīng)細(xì)胞凋亡作用的金納米粒復(fù)合物在制備抑制神經(jīng)細(xì)胞凋亡的藥物中的應(yīng)用。

8.權(quán)利要求6所述具有抑制神經(jīng)細(xì)胞凋亡作用的金納米粒復(fù)合物在制備治療帕金森病的藥物中的應(yīng)用。