[發明專利]立體化培養細胞在骨科藥物篩選中的應用

在審

• 申請號: 201510059901.2
• 申請日: 2015-02-04
• 公開（公告）號: CN104774903A
• 公開（公告）日: 2015-07-15
• 發明（設計）人: 周光前
• 申請（專利權）人: 周光前
• 主分類號: C12Q1/02
• 分類號: C12Q1/02;C12N5/0775
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及一種立體化培養細胞的方法及其篩選基質，具體涉及到該方法在骨科藥物篩選中的應用，屬于醫藥生物技術領域。

背景技術

大規模細胞培養技術是指在人工條件下(設定ph、溫度、溶氧等)，在細胞生物反應器中高密度大量培養細胞用于生產生物制品的技術。目前大規模培養細胞主要采用轉瓶培養系統和不銹鋼罐培養系統。轉瓶培養存在以下問題：其表面積有限，細胞生長密度低；培養時監測和控制環境條件(pH、溶氧等)不穩定，影響產品質量；勞動強度大，占用空間大，污染率高。不銹鋼罐培養存在以下問題：需要復雜的在位清洗(CIP)或在位滅菌(SIP)管路，工藝流程運行之間交叉污染的可能性；每生產批次準備時間長，生產人員勞動強度大；攪拌系統剪切力大，細胞損傷嚴重。這些細胞進行藥物篩選，直接與細胞共培養，致使細胞周圍的藥物濃度完全一致。而在藥物篩選過程中，最初都是采用這些培養方法獲得的細胞與藥物共培養進行篩選，可實際情況是藥物是通過滲透進入人體的，使不同細胞周圍的藥物濃度不同。

公開號為CN102188752A的中國專利介紹了一種制備骨髓間充質干細胞-管道支架復合物的方法及裝置，包括：(1)細胞接種：將供細胞立體培養的管道支架經消毒處理后，吸取第3代骨髓間充質干細胞的細胞懸液，均勻滴加至管道支架外表面，待吸收完全后將管道支架置于注射器內，負壓抽吸2～5次；(2)靜態培養：將接種后的管道支架置于細胞培養裝置中，添加干細胞培養液中靜態培養20～30小時；(3)灌流培養：將管道支架置于灌流培養槽中，所述灌流培養槽內徑與所述管道支架外徑相匹配，軸心位置設置有與所述管道支架中央通道相匹配的實心柱體，管道支架放置于柱體與外壁間的空腔內，空腔底部有供培養液流通的多孔底板；往灌流培養槽中通入干細胞培養液，在0.1～0.3mL/min流速下灌流培養10～15天，制備得到所述骨髓間充質干細胞-管道支架復合物。該發明方法提高了骨髓間充質干細胞在PCL管道支架內的接種效率，并提高了細胞在管道支架外壁內的均勻分布和擴增能力，利用這種方法可獲得骨髓間充質干細胞均勻以及高密度分布的復合管道支架，有望應用于臨床上管道組織損傷的修復。

公開號為CN102935246A的中國專利介紹了一種三維細胞培養支架及其制備方法和應用，包括：固相磷酸鈣含量為50～55％(重量體積比)的料漿的配制；聚甲基丙烯酸甲酯微球的制備；多孔磷酸鈣支架的制備；將步驟3制備的多孔磷酸鈣支架放入質量百分含量為4～7％的海藻酸鈉鹽酸溶液中，真空浸泡1-2h，用超純水反復洗滌三次，即得。該支架具有制備簡單，便于操作和運輸等優點。本發明還提供該三維培養支架的制備方法和應用。

公開號為CN102517211A的中國專利介紹了一種可快速解離型三維細胞培養載體及制備方法。是以羧甲基改性的殼聚糖為原料，將其溶解于pH＝5～8的磷酸鹽或2-(N-嗎啉代)乙磺酸緩沖液中，然后加入碳二亞胺活化的二硫代二元酸交聯劑，通過羧甲基殼聚糖中氨基與交聯劑中羧基間的酰胺化反應形成三維化學交聯的水凝膠，最后通過冷凍干燥得到三維多孔載體。該載體材料中的二硫鍵可被其還原劑迅速還原斷裂，實現多孔載體快速解離而溶解，能滿足多種體外三維細胞培養和培養結束后需要細胞-載體材料有效分離的特殊需求。本發明的殼聚糖基水凝膠三維細胞培養載體具有原料易得、工藝簡單、易生物活性改性，以及載體理化性質、力學性能和降解速率可控等優點，在各種三維細胞培養中具有良好的應用前景。

公開號為CN101626781的中國專利介紹了一種制備具有抗腫瘤免疫應答反應細胞群的方法，包括將腫瘤與單個核細胞置于三維細胞培養裝置中共同培養，以及從獲得的培養物中分離擴增具有免疫應答反應的細胞群。本發明還公開了采用本方法獲得的具有抗腫瘤免疫應答反應的細胞群及含有所述細胞群的試劑盒。

公開號為CN101448932的中國專利介紹了一種三維細胞培養，包括將前脂肪細胞引入到三維支持物基質中，和容許所述細胞在所述支持物基質中體外分化為脂肪細胞。所述基質可以是膠原基質。本方法可以用于研究干細胞的發育，或用于研究脂肪細胞對刺激的響應。本方法提供了這樣的系統，由此具有與體內的那些類似生物特征的脂肪細胞能夠在體外生長。