[發(fā)明專利]一種檢測(cè)抗豬流行性腹瀉病毒抗體的ELISA檢測(cè)試劑盒及其使用方法和用途

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201510059767.6
• 申請(qǐng)日: 2015-02-05
• 公開（公告）號(hào): CN104730238A
• 公開（公告）日: 2015-06-24
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 黃小波;曹三杰;張雨迪;文心田;段素芬;文翼平;伍銳;朱書權(quán);鄧麗;李亞青
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 四川農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號(hào): G01N33/569
• 分類號(hào): G01N33/569;G01N33/561
• 代理公司: 成都高遠(yuǎn)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 51222
• 代理人: 李高峽;張娟

1.一種檢測(cè)抗豬流行性腹瀉病毒抗體的ELISA檢測(cè)試劑盒，其特征在于：它是以氨基酸序列如SEQ?ID?NO：2所示的重組豬流行性腹瀉病毒N蛋白為抗原，檢測(cè)待檢樣品中的抗豬流行性腹瀉病毒抗體。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測(cè)試劑盒，其特征在于：所述ELISA檢測(cè)試劑盒為間接ELISA檢測(cè)試劑盒，它包括如下組分：

(1)氨基酸序列如SEQ?ID?NO：2所示的重組豬流行性腹瀉病毒N蛋白；

(2)酶標(biāo)板；

(3)抗原包被液；

(4)洗滌液；

(5)封閉液；

(6)樣品稀釋液；

(7)酶標(biāo)二抗；

(8)底物液；

(9)終止液。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的檢測(cè)試劑盒，其特征在于：所述抗原包被液是碳酸鹽溶液。

4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的檢測(cè)試劑盒，其特征在于：所述洗滌液或樣品稀釋液是PBST溶液。

5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的檢測(cè)試劑盒，其特征在于：所述封閉液為5％的脫脂牛奶、1％的BSA或3％的明膠。

6.根據(jù)權(quán)利要求2所述的檢測(cè)試劑盒，其特征在于：所述酶標(biāo)二抗為辣根過氧化物酶標(biāo)記兔抗豬IgG。

7.根據(jù)權(quán)利要求2所述的檢測(cè)試劑盒，其特征在于：所述底物液是濃度為0.208mmol/L的TMB溶液。

8.根據(jù)權(quán)利要求2所述的檢測(cè)試劑盒，其特征在于：所述終止液是濃度為2mol/L的H₂SO₄溶液。

9.權(quán)利要求1～8任意一項(xiàng)檢測(cè)試劑盒的使用方法，其特征在于：它包括如下步驟：

(1)包被：取氨基酸序列如SEQ?ID?NO：2所示的重組豬流行性腹瀉病毒N蛋白，用包被液稀釋至蛋白濃度為0.313～10μg/mL，包?被酶標(biāo)板，洗滌；

(2)封閉：加入封閉液封閉，洗滌；

(3)加待檢樣品：取待檢樣品，用稀釋液稀釋10～320倍，加入微孔板中，37℃溫育1h，洗滌；

(4)加酶標(biāo)二抗：取酶標(biāo)二抗，用稀釋液稀釋2000倍，加入微孔板中，37℃反應(yīng)30min，洗滌；

(5)加底物：加入底物液，室溫避光反應(yīng)10～15min；

(6)終止反應(yīng)：加入終止液，終止反應(yīng)，測(cè)定其OD450值。

10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的使用方法，其特征在于：

步驟(1)中，用包被液稀釋蛋白至濃度為2.5μg/mL；

步驟(3)中，待檢樣品用稀釋液稀釋20倍。

11.權(quán)利要求1～8任意一項(xiàng)檢測(cè)試劑盒在制備豬流行性腹瀉病毒的檢測(cè)試劑盒中的用途。