[發明專利]卡麻孜日尤司乙酰膽堿酯酶抑制活性提取物及其組合物的醫藥用途和制備方法

在審

• 申請號: 201510058758.5
• 申請日: 2015-02-04
• 公開（公告）號: CN104825520A
• 公開（公告）日: 2015-08-12
• 發明（設計）人: 熱娜·卡斯木;王金輝;李國玉;黃健;李理;胡君萍;曹苑;張珂
• 申請（專利權）人: 新疆醫科大學
• 主分類號: A61K36/282
• 分類號: A61K36/282;A61P25/28;G01N30/90
• 代理公司: 烏魯木齊合縱專利商標事務所 65105
• 代理人: 湯潔

技術領域

本發明屬醫藥技術領域，具體涉及一種卡麻孜日尤司乙酰膽堿酯酶抑制活性提取物及其組合物的制備方法以及它在治療阿爾茨海默病(AD)等方面的醫藥用途。

背景技術

本品為菊科植物苦蒿Dcroptiol?repens(L.)Dc的干燥果實本發明通過大規模、系統地活性篩選，意外地發現維吾爾藥卡麻孜日尤司提取物及其部分化學組分，具有顯著地乙酰膽堿酯酶抑制活性，該活性提取物及其組合物有望應用于治療阿爾茨海默病(AD)等方面的醫藥用途。

發明內容

本發明所解決的技術問題是提供一種卡麻孜日尤司提取物。

本發明還提供了以卡麻孜日尤司提取物為主要活性成分的組合物。

本發明同時提供了卡麻孜日尤司提取物及其組合物的制備和在治療阿爾茨海默病(AD)中的應用。

本發明是通過如下技術方案實現的：

維吾爾藥卡麻孜日尤司經甲醇超聲提取，提取液濃縮后，用硅膠（SiO₂）柱分離，上樣后的硅膠柱，用石油醚-乙酸乙酯混合溶劑梯度洗脫（石油醚-乙酸乙酯，比例見表1），各石油醚-乙酸乙酯比例混合溶劑洗脫液，濃縮，干燥后，利用體外篩選體系測試其乙酰膽堿酯酶抑制活性，意外地發現先用石油醚洗脫，繼用石油醚-乙酸乙酯混合溶劑（石油醚-乙酸乙酯，100:1，體積比）洗脫得到的石油醚-乙酸乙酯混合溶劑（石油醚-乙酸乙酯，100:1，體積比）洗脫液經回收有機溶劑，干燥，即為乙酰膽堿酯酶抑制活性提取物。而其他比例的洗脫部位，沒有乙酰膽堿酯酶抑制活性的作用。特別地，優選先用石油醚洗脫10倍柱體積，繼用石油醚-乙酸乙酯混合溶劑（石油醚-乙酸乙酯，100:1，體積比）洗脫30倍柱體積，洗脫液干燥后為本發明乙酰膽堿酯酶抑制活性的提取物，其可以通過以上方法得到富集，從而與其他雜質類成分分離開。該卡麻孜日尤司乙酰膽堿酯酶抑制活性提取物從未見文獻報道，其薄層譜色譜（TLC）分析表征如圖1，TLC分析條件：GF254硅膠板，展開系統：石油醚：乙酸乙酯：丙酮（3:1:1）顯色方法：香草醛-硫酸顯色。

具體，發現過程如下：

1、卡麻孜日尤司經甲醇超聲提取物的制備

取維吾爾藥卡麻孜日尤司20?g，經100?mL甲醇超聲提取15?min，提取液濃縮后，得提取物A(甲醇提取)：1.2752?g；B（大孔樹脂處理）：0.3269?g，合并留樣：0.4165?g，剩余樣品上硅膠柱(1.1856?g).

石油醚-乙酸乙酯系統洗脫。

2、石油醚-乙酸乙酯混合溶劑梯度洗脫方法和結果

取維吾爾藥卡麻孜日尤司20?g，經100?mL甲醇超聲提取15?min，提取液濃縮后，得提取物SN0050，A(甲醇提取)：1.2752?g；B（大孔樹脂處理）：0.3269?g,，合并留樣：0.4165?g，剩余樣品上硅膠柱(1.1856?g)，上樣量：1.1856?g；拌樣硅膠：1.5?g；空白硅膠10?g；，石油醚-乙酸乙酯系統梯度洗脫（條件見表1），一個柱體積為29?ml；?柱子內徑：2?cm，每個梯度洗脫200?mL，得到，各個濃度提取洗脫液的洗脫物，回收溶劑，即得，石油醚：乙酸乙酯梯度洗脫提取物，TLC分析結果見圖2，?TLC分析條件：GF254硅膠板，展開系統：，石油醚：乙酸乙酯：丙酮（3:1:1）顯色方法：香草醛-濃硫酸顯色。

表1

3、抑制乙酰膽堿酯酶活性篩選方法和結果

1)????????實驗條件

a、材料：DMSO(二甲基亞砜)?(科密歐公司)；KH₂PO₄、K₂HPO₄·3H₂O(廣東汕頭市西隴化工廠)；AchE酶(美國Sigma公司)；PNPG(美國Sigma公司)

b、實驗儀器：多功能酶標儀Bio-Rad?Model?680型(Bio-Rad?Laboratories?Inc.)

2)????????實驗方法和過程

樣品處理：將1?mg待測樣品溶于20?μL二甲基亞砜(DMSO)作為母液，取1?μL母液加入249?μL蒸餾水配成200?μg·mL^-1的溶液。

乙酰膽堿酯酶抑制活性測定方法：