[發(fā)明專利]貫葉金絲桃丁酰膽堿酯酶抑制活性提取物及其組合物的醫(yī)藥用途和制備方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201510058757.0
• 申請日: 2015-02-04
• 公開（公告）號: CN104666375A
• 公開（公告）日: 2015-06-03
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 熱娜·卡斯木;王金輝;黃健;李國玉;孫富周;王曉梅;曹苑;張珂
• 申請（專利權(quán)）人: 新疆醫(yī)科大學(xué)
• 主分類號: A61K36/185
• 分類號: A61K36/185;A61P35/00;A61P25/28;G01N30/90
• 代理公司: 烏魯木齊合縱專利商標(biāo)事務(wù)所 65105
• 代理人: 湯潔

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種貫葉金絲桃丁酰膽堿酯酶抑制活性提取物及其組合物制備方法以及它在治療阿爾茨海默病(AD)等方面的醫(yī)藥用途。

背景技術(shù)

貫葉金絲桃為金絲桃科(Clusiaceae)，貫葉金絲桃(Hyperium?perforatum)是我國的傳統(tǒng)用藥，其主要成分為金絲桃素、偽金絲桃素等具有抗抑郁、抗病毒、治療創(chuàng)傷等多種作用。貫葉金絲桃浸膏制劑已經(jīng)在德國上市，并已占德國抗中、輕度抑郁癥藥物市場的將近50%，許多國家也已將貫葉金絲桃制劑作為外用藥和抗抑郁癥的鎮(zhèn)靜藥。

在高通量篩選的過程中，本發(fā)明意外地發(fā)現(xiàn)大葉貫葉金絲桃具有很好的抑制丁酰膽堿酯酶的活性，該活性提取物及其組合物有望應(yīng)用于治療阿爾茨海默病(AD)等方面的醫(yī)藥用途。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明所解決的技術(shù)問題是提供一種貫葉金絲桃提取物。

本發(fā)明還提供了以貫葉金絲桃提取物為主要活性成分的組合物。

本發(fā)明同時提供了貫葉金絲桃提取物及其組合物的制備和其在制備丁酰膽堿酯酶抑制活性的應(yīng)用。

本發(fā)明是通過如下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的：

維吾爾藥貫葉金絲桃經(jīng)溶劑超聲提取，提取液濃縮后，用硅膠（SiO₂）柱分離，上樣后的硅膠柱，用石油醚-丙酮混合溶劑梯度洗脫（石油醚-丙酮，比例見表1），各石油醚-丙酮比例混合溶劑洗脫液，濃縮，干燥后，利用體外篩選體系測試其丁酰膽堿酯酶抑制活性，意外地發(fā)現(xiàn)先用石油醚-丙酮混合溶劑（石油醚-丙酮，100:3，體積比）洗脫，繼用石油醚-丙酮混合溶劑（石油醚-丙酮，100:12，體積比）洗脫得到的石油醚-丙酮混合溶劑（石油醚-丙酮，100:12，體積比）洗脫液經(jīng)回收有機(jī)溶劑，干燥，即為丁酰膽堿酯酶抑制活性提取物。而其他比例的洗脫部位，沒有丁酰膽堿酯酶抑制活性的作用。特別地，優(yōu)選為先用石油醚-丙酮混合溶劑（石油醚-丙酮，100:3，體積比）洗脫15倍柱體積，繼用石油醚-丙酮混合溶劑（石油醚-丙酮，100:12，體積比）洗脫25倍柱體積，洗脫液為本發(fā)明丁酰膽堿酯酶抑制活性的提取物。丁酰膽堿酯酶抑制活性的提取物可以通過以上方法得到富集，從而與其他雜質(zhì)類成分分離開。該貫葉金絲桃丁酰膽堿酯酶抑制活性提取物從未見文獻(xiàn)報道，其薄層色譜（TLC）分析結(jié)果見圖1，?TLC分析條件：GF₂₅₄硅膠板，展開系統(tǒng)：石油醚：乙酸乙酯：丙酮=6:1:1，顯色方法：香草醛-硫酸顯色。

維吾爾藥貫葉金絲桃經(jīng)超聲提取，提取液濃縮后，用硅膠柱分離，上樣后的硅膠柱，用石油醚-丙酮混合溶劑梯度洗脫（石油醚-丙酮，比例見表1），各石油醚-丙酮比例混合溶劑洗脫液，濃縮，干燥后，利用體外篩選體系測試其丁酰膽堿酯酶抑制活性，意外地發(fā)現(xiàn)先用石油醚-丙酮混合溶劑（石油醚-丙酮，100:100，體積比）洗脫，繼用甲醇洗脫得到，甲醇洗脫液經(jīng)回收有機(jī)溶劑，干燥，即為丁酰膽堿酯酶抑制活性提取物。而其他比例的洗脫部位，沒有丁酰膽堿酯酶抑制活性的作用。即，丁酰膽堿酯酶抑制活性的提取物，可以通過以上方法得到富集，從而與其他雜質(zhì)類成分分離開。該貫葉金絲桃丁酰膽堿酯酶抑制活性提取物從未見文獻(xiàn)報道，其薄層色譜（TLC）分析結(jié)果見圖2，TLC分析條件：GF₂₅₄硅膠板，展開系統(tǒng)：石油醚：乙酸乙酯：丙酮=3:1:1顯色方法：香草醛-硫酸顯色。

具體，發(fā)現(xiàn)過程如下：

1、貫葉金絲桃經(jīng)甲醇超聲提取物的制備

取維吾爾藥貫葉金絲桃20?g，經(jīng)超聲提取，提取液濃縮后，得提取物SN0012AB，樣品1.0015，留樣0.0502g，上柱0.9513g，拌樣硅膠1.4?g，空白硅膠5g，石油醚-丙酮系統(tǒng)。

2、石油醚-丙酮混合溶劑梯度洗脫方法和結(jié)果

取維吾爾藥貫葉金絲桃20?g，經(jīng)超聲提取，提取液濃縮后，得提取物SN0012AB，1.0015?g，留樣0.0502g，上柱0.9513g，丙酮溶解，共用甲醇15?mL。上硅膠柱色譜，拌樣硅膠1.4?g，空白硅膠5?g，玻璃柱內(nèi)徑1.5cm，石油醚-丙酮系統(tǒng)梯度洗脫（條件見表1），柱體積12.5?mL，每個梯度洗脫100mL，得到各個濃度提取洗脫液的洗脫物，回收溶劑，即得，石油醚：丙酮梯度洗脫提取物，TLC分析結(jié)果見圖3和圖4，TLC分析條件：GF₂₅₄硅膠板，展開系統(tǒng)：石油醚：乙酸乙酯：丙酮=6:1:1及石油醚：乙酸乙酯：丙酮=3:1:1顯色方法：香草醛-硫酸顯色。

表1

3、抑制丁酰膽堿酯酶活性篩選方法和結(jié)果