[發明專利]一種藍耳病疫苗抗原純化的方法

有效

• 申請號: 201510056212.6
• 申請日: 2015-02-03
• 公開（公告）號: CN104673761B
• 公開（公告）日: 2017-07-18
• 發明（設計）人: 黃文強;丁錦茂;潘德春;楊君敬;吳宗學;王賀民
• 申請（專利權）人: 乾元浩生物股份有限公司
• 主分類號: C12N7/04
• 分類號: C12N7/04
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司11002
• 代理人: 王文君

技術領域

本發明涉及生物制品技術領域，具體地涉及一種藍耳病疫苗抗原純化的方法。

背景技術

在我國，藍耳病(豬繁殖與呼吸綜合征病)疫苗的抗原由病毒接種細胞直接培養得到，沒有后續的抗原下游處理工藝，該生產工藝生產的抗原雜質較多，導致疫苗的免疫副反應大，產品質量不穩定，影響疫苗免疫效果。近年來也有企業、學者在藍耳病疫苗抗原下游加工處理方面進行了研究。唐艷玲等在2013年采用分子篩層析柱對藍耳病滅活疫苗抗原進行純化，蛋白去除率達到96％，病毒回收率在76.7％～82.4％之間。該方法可有效的去除抗原雜蛋白，但填充介質需要人工進行，受操作者的因素影響較大，工藝的可重復性較差，且該方法成本較高，不適用于當前的疫苗生產。

藍耳病疫苗抗原通常來自于藍耳病病毒感染細胞后進行細胞培養、獲得的細胞培養的裂解產物，其中含有大量大小不等的細胞裂解碎片，成分較為復雜，因此純化藍耳病疫苗抗原的條件和方法較利用雞胚生產的疫苗抗原的純化方法更為復雜，需要對其純化方法進行更進一步的研究和優化，以獲得更高的抗原回收率。

發明內容

為克服上述缺陷，本發明的目的是提供一種工序簡單、利于操作、成本低廉的藍耳病疫苗抗原純化的方法。

為實現上述目的，本發明利用分子量切割的超濾技術對藍耳病疫苗抗原進行純化，該方法包括如下步驟：

(1)將收獲的藍耳病疫苗抗原經離心機離心澄清，收取澄清的抗原液；

(2)將步驟(1)得到的澄清抗原液泵入超濾系統進行純化；

(3)用緩沖液將步驟(2)中純化得到的抗原液稀釋至原體積繼續純化；

(4)用緩沖液將步驟(3)中純化得到的抗原液稀釋至原體積繼續純化后，收獲純化的藍耳病疫苗抗原。

本發明提供的對藍耳病疫苗抗原進行純化的方法中，步驟(1)所述的藍耳病疫苗抗原為經滅活劑滅活后的藍耳病滅活疫苗抗原或藍耳病活疫苗抗原。

其中，步驟(1)采用差速離心的方法。

所述差速離心為先采用4000-7000rpm離心20-40min，取上清棄沉淀，然后將上清液以8000-12000rpm離心50-70min，取上清備用。

優選地，所述差速離心為先采用6000rpm離心30min，取上清棄沉淀，然后將上清液以10000rpm離心60min，取上清備用。

本發明提供的對藍耳病疫苗抗原進行純化的方法中，步驟(2)中超濾系統為切向流超濾系統。

所述切向流超濾系統為平板式切向流超濾系統。

進一步地，切向流超濾系統膜包的分子量大小為100-500KD。

優選地，切向流超濾系統膜包的分子量大小為300KD。

其中，步驟(2)和步驟(3)中抗原液在超濾系統中進行純化的同時需要將抗原液濃縮至原體積1/10以上，收取回流液，棄去透過液。

本發明方法中，所述的緩沖液為0.01M pH值7.2-7.4的PBS緩沖液。

抗原液泵入超濾系統進行純化時，抗原液進入超濾膜包的流速不超過0.8ml/min/cm²。

本發明的有益效果：本發明提供了藍耳病疫苗抗原純化的方法，為提高我國藍耳病疫苗質量提供新技術。該技術操作簡單，可操作性強，工藝穩定，受人為因素影響較小，可重復性強。純化的疫苗抗原蛋白去除率達到90％以上，抗原回收率達到100％。在藍耳病疫苗生產中具有明顯的優勢和巨大的應用價值，對于降低藍耳病疫苗的免疫副反應以及提高疫苗產品質量具有積極的意義。

具體實施方式

以下實施例用于說明本發明，但不用來限制本發明的范圍。在不背離本發明精神和實質的情況下，對本發明方法、步驟或條件所作的修改或替換，均屬于本發明的范圍。

若未特別指明，實施例中所用的技術手段為本領域技術人員所熟知的常規手段。

實施例1藍耳病活疫苗抗原純化

(1)將收獲的藍耳病活疫苗抗原先采用6000rpm離心30min，取上清棄沉淀，然后將上清液以10000rpm離心60min，取上清備用；

(2)將離心澄清后的抗原泵入分子量大小為300KD的切向流超濾系統進行純化，進液速率為0.4ml/min/cm²，同時濃縮至原體積的1/10，棄去透過液，保留回流液；