[發明專利]一種一步薄層層析快速檢測生物胺的方法

有效

• 申請號: 201510055642.6
• 申請日: 2015-02-03
• 公開（公告）號: CN104597199A
• 公開（公告）日: 2015-05-06
• 發明（設計）人: 夏小樂;張無疾;張清文;馬吉;王武;周哲敏
• 申請（專利權）人: 江南大學
• 主分類號: G01N30/90
• 分類號: G01N30/90
• 代理公司: 北京愛普納杰專利代理事務所(特殊普通合伙) 11419
• 代理人: 張勇

技術領域

本發明涉及一種一步薄層層析快速檢測生物胺的方法，屬于食品分析和安全技術領域。

背景技術

生物胺是一類具有生物活性含氮的低分子量有機化合物的總稱；含有蛋白質和氨基酸的食品，在一定條件下通過氨基酸的脫羧反應或醛的胺化作用便可產生生物胺。目前已發現水產品、肉制品、干酪及乳制品、酒及各類發酵食品、蔬菜、水果、干果和巧克力等食品中均含有多種生物胺。過量的生物胺被證明對人體會產生一些不良的生理反應，在食品保藏學中，生物胺往往是在食品腐爛或發酵過程中產生；組胺和酪胺是存在于食品中含量最多、也是對人類健康影響最大的兩種生物胺。

歐洲食品安全局(EFSA)將歐盟范圍內含大量組氨酸魚制品中組胺的含量制定為≤100mg/kg或100～200mg/kg；將用含大量組氨酸魚類制作、在鹽水中經酶熟化處理的制品組胺含量制定為≤200mg/kg或200～400mg/kg。EFSA對食品中的組胺含量沒有加以限定，建議上限為100mg/kg(食品)或2mg/L(含酒精飲料)；美國食品藥品管理局(FDA)基于組胺500mg/kg的毒性，制定美國國內金槍魚、鬼頭刀及相關魚類中組胺的干預水平為50mg/kg。同時認為，500～1000mg/kg以上的組胺對人體健康有潛在危險。而對酪胺和苯乙胺的安全閾值，所給出的建議參考上限分別為100～800mg/kg和30mg/kg；我國GB2733—2005《鮮(凍)動物性水產品衛生標準》規定鮐魚中組胺含量應低于1000mg/kg，其他魚類中組胺含量應低于300mg/kg。

目前食品中生物胺的檢測一般采用高效液相色譜(HPLC)，生物傳感器等方法。這些方法均有一定的應用，也各有優缺點；如最常用的RP—HPLC法，一般認為其具有檢測靈敏度高、定量分析準確和柱效高等優點，且有多個標準方法基于該技術實施；但是該方法需要高效液相色譜，且儀器預熱平衡和分析等過程時間較長，速度較慢，靈活性較差。生物傳感器由于其具有在線監測的能力被推崇，但是現有技術仍不是非常成熟，市場較少有可靠的成套裝備，且價格較昂貴。

薄層色譜是一種無需昂貴的分析儀器，費用低，操作簡便、快捷，檢測限能夠達到ng級別的方法。現已有效地應用于臨床和生化檢驗、毒物分析、藥材及其制劑真偽的鑒定、質量控制、含量測定和資源調查等方面。但是薄層色譜需先對樣品進行衍生再進行薄層層析檢測，其中對樣品的衍生化處理最為關鍵，一般需要考慮到衍生劑的選擇、衍生劑與樣品液的體積比、衍生反應的時間和溫度。

因此在食品加工和流通等環節迫切需要一種無需對樣品進行衍生處理，將樣品點在薄層層析板就能夠檢測的一步薄層層析檢測生物胺的方法，從而滿足現場快速檢測的需要，切實保障食品安全。

發明內容

本發明的目的是克服上述現有技術中的缺點，提供一種一步薄層層析快速檢測生物胺的方法，本發明設計巧妙、易操作、成本低、速度快、適于大規模應用。

本發明的第一個目的是提供一種快速檢測生物胺的方法，所述方法包括：(1)活化硅膠的制備：對硅膠進行環氧基、氨基、醛基的活化，使硅膠依次接上環氧基、氨基和醛基；(2)活化薄層層析板的制備：活化好的硅膠介質分別進行調漿，鋪板和層析板活化制得活化薄層層析板；(3)待測樣品中生物胺的薄層層析分析：從待測樣品中進行生物胺提取、生物胺提取液凈化得到的生物胺凈化液，點在活化的薄層層析板上，展開，檢測目標生物胺的有無或者定量測定生物胺的含量。

所述步驟(1)，在本發明的一種實施方式中，是使用環氧氯丙烷、雙環氧乙烷、苯氧基環氧丙烷、二—(環氧丙基)—鄰苯并咪唑酮中的任意一種對硅膠進行環氧基活化。

所述環氧基活化，在本發明的一種實施方式中，環氧基的活化條件：以體積比1:0.5-1:2的0.4-1.2mol/LNaOH溶液與DMSO的混合液作為混合溶劑，震蕩，活化溫度為30-40℃，活化時間8-14h，環氧氯丙烷、雙環氧乙烷、苯氧基環氧丙烷或二—(環氧丙基)—鄰苯并咪唑酮的用量為2-10mL/g硅膠。

所述環氧基活化，在本發明的一種實施方式中，以環氧氯丙烷作為環氧基活化液，NaOH溶液濃度為0.8-1.0mol/L，NaOH溶液與DMSO體積比為1:1-1:1.5，活化溫度為33-36℃，活化時間為10-12h，環氧氯丙烷的用量為4-7mL/g硅膠。

所述步驟(1)，在本發明的一種實施方式中，是使用氨水、氯胺、乙二胺、雙氯胺中的任意一種對硅膠進行氨基活化。