[發明專利]一種一步薄層層析快速檢測生物胺的方法

有效

• 申請號: 201510055642.6
• 申請日: 2015-02-03
• 公開（公告）號: CN104597199A
• 公開（公告）日: 2015-05-06
• 發明（設計）人: 夏小樂;張無疾;張清文;馬吉;王武;周哲敏
• 申請（專利權）人: 江南大學
• 主分類號: G01N30/90
• 分類號: G01N30/90
• 代理公司: 北京愛普納杰專利代理事務所(特殊普通合伙) 11419
• 代理人: 張勇

1.一種快速檢測生物胺的方法，其特征在于，所述方法包括：(1)活化硅膠的制備：對硅膠進行環氧基、氨基、醛基的活化，使硅膠依次接上環氧基、氨基和醛基；(2)活化薄層層析板的制備：活化好的硅膠介質分別進行調漿，鋪板和層析板活化制得活化薄層層析板；(3)待測樣品中生物胺的薄層層析分析：從待測樣品中進行生物胺提取、生物胺提取液凈化得到的生物胺凈化液，點在活化的薄層層析板上，展開，檢測目標生物胺的有無或者定量測定生物胺的含量。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟(1)中是使用環氧氯丙烷、雙環氧乙烷、苯氧基環氧丙烷、二—(環氧丙基)—鄰苯并咪唑酮中的任意一種對硅膠進行環氧基活化；所述環氧基活化的條件：以體積比1:0.5-1:2的0.4-1.2mol/L?NaOH溶液與DMSO的混合液作為混合溶劑，震蕩，活化溫度為30-40℃，活化時間8-14h，環氧氯丙烷、雙環氧乙烷、苯氧基環氧丙烷或二—(環氧丙基)—鄰苯并咪唑酮的用量為2-10mL/g硅膠。

3.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟(1)中是使用氨水、氯胺、乙二胺、雙氯胺中的任意一種對硅膠進行氨基活化；所述氨基活化的條件：以質量分數為5％-15％的氨水、氯胺、乙二胺或雙氯胺作為活化液系，震蕩，活化溫度為32-38℃，活化時間8-14h，5％-15％的氨水、氯胺、乙二胺或雙氯胺的用量為15-30ml/g硅膠。

4.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟(1)中是使用鄰苯二甲醛、戊二醛、乙二醛、己二醛中的任意一種對硅膠進行醛基活化；所述醛基活化的條件：以6-12g/L的鄰苯二甲醛、戊二醛、乙二醛或己二醛作為活化液系，震蕩，活化溫度為26-32℃，活化時間15-45min，6-12g/L的鄰苯二甲醛、戊二醛、乙二醛或己二醛的用量為5-12ml/g硅膠。

5.根據權利要求1-4任一所述的方法，其特征在于，所述步驟(2)中的調漿是每取活化硅膠6-14g，加入2.2-2.8g無水硫酸鈣，加入6-12ml去離子水，使固液1:0.5-1:1.5混合調成勻漿；所述步驟(2)中的鋪板是將勻漿均勻傾倒在層析板上，然后真空干燥；

6.根據權利要求1-4任一所述的方法，其特征在于，所述步驟(2)中的層析板活化是將鋪板后的薄層層析板放入充滿保護氣體的裝置中進行層析板活化，活化后迅速放入裝有變性硅膠干燥劑的裝置中備用。

7.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟(3)中生物胺凈化液按以下方法制備：將食品樣品，用水、酸性介質或有機相介質提取樣品中生物胺，然后用三氯乙酸稀釋，獲得生物胺提取液；將生物胺提取液與正己烷混合、萃取脫去脂肪，然后進行液—液萃取，氮氣吹干并加入鹽酸溶解殘留物，獲得生物胺凈化液。

8.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟(3)中生物胺的檢測是：采用碘蒸汽或噴霧顯色或者不顯色，然后于360nm紫外條件下對色譜板進行觀察以確定樣品中是否存在目標生物胺，或者是采用薄層掃描儀在參比波長360nm，樣品波長254nm條件下對色譜板進行掃描，根據每個斑點的吸光值進行定量計算。

9.一種薄層層析板，其特征在于，所述薄層層析板通過以下方法制備：對硅膠進行環氧基、氨基、醛基的活化，使硅膠依次接上環氧基、氨基和醛基，然后將活化好的硅膠介質分別進行調漿，鋪板和層析板活化制得活化薄層層析板。

10.權利要求9所述薄層層析板在生物胺快速檢測方面的應用。