[發明專利]一種檢測遺傳性耳聾易感基因突變的試劑盒

有效

• 申請號: 201510054294.0
• 申請日: 2015-02-02
• 公開（公告）號: CN104694629B
• 公開（公告）日: 2018-05-18
• 發明（設計）人: 華琴;潘海波;邢楠楠
• 申請（專利權）人: 江蘇佰齡全基因生物醫學技術有限公司
• 主分類號: C12Q1/6883
• 分類號: C12Q1/6883
• 代理公司: 上海泰能知識產權代理事務所 31233
• 代理人: 黃志達

本發明涉及一種檢測遺傳性耳聾易感基因突變的多重連接探針擴增檢測試劑盒，包括突變位點特異性的檢測探針、通用引物，以及陽性DNA模板、DNA連接酶、連接緩沖溶液、雜交液、PCR反應試劑；檢測探針由一對短探針和長探針組成，對應一個突變位點。本方法靈敏度高，結果準確，相對傳統檢測技術，本試劑盒能一次性完成多個關鍵遺傳性耳聾基因突變診斷的高通量篩查，具有經濟、高效和高準確率的優勢。

技術領域

本發明屬生物技術領域，特別是涉及一種用于檢測遺傳性耳聾易感基因突變的多重連接探針擴增檢測試劑盒。

背景技術

聾病是臨床上最常見的遺傳性疾病之一，也是影響人類健康的常見疾病。據統計，中國聽力語言殘疾者有2780萬人，占全國現有殘疾人總數的34％，其中單純聽力殘疾的有2004萬人，聽力殘疾現殘率約為2.11％；每1000個新生兒中就有1～3例聾兒，7歲以下聾兒約有74萬人，并以每年2～3萬的速度增長。約60％的新生聾兒是由遺傳因素導致的。另外在大量遲發性聽力下降患者中，許多患者因自身基因缺陷而致病，或因基因缺陷和多態性對特定環境因素易感而致病遺傳性耳聾，還有40％為環境因素所致。減少耳聾的發生重在早期的預防與干預，對于環境因素導致的耳聾，可以通過預防感染、加強孕期圍產期保健、避免應用耳毒性藥物等措施有效地預防；但對于遺傳性耳聾的預防，關鍵是明確耳聾病因。

遺傳性耳聾絕大多數為異質性較強的單基因遺傳病，其中30％的遺傳性耳聾病例屬于綜合征性耳聾，其余的遺傳性耳聾絕大多數非NSHL。迄今為止，與NSHL相關的40個常染色體隱性基因、25個常染色體顯性基因、3個X連鎖基因已被克隆。大規模耳聾分子流行病學研究表明，我國人群中最常見的致病基因包括間隙連接蛋白β2GJB2(Gap Junctionprotein beta 2)、間隙連接蛋白β3GJB3(Gap Junction protein beta 3)、SLC26A4(PDS)、線粒體DNA(Mitochondrion DNA)12S rRNA。

GJB2基因編碼的Cx26屬于縫隙連接蛋白基因家族，與相鄰細胞的縫隙連接蛋白組成一個完整的縫隙連接通道，這些通道在信息傳導和物質交換中起重要作用，是完成電解質、第二信使和代謝產物的細胞間轉換的重要通道。當毛細胞受到外界刺激后，鉀離子經內耳毛細胞循環回流進入耳蝸內淋巴液，縫隙連接蛋白通道在此過程中具有調控作用。Cx26在人類的耳蝸毛細胞中高表達，因此GJB2基因突變與耳聾密切相關。大部分GJB2基因編碼區的突變導致蛋白質翻譯過程中的移碼突變，產生無功能的蛋白質，影響了縫隙連接蛋白的結構，從而影響通道的正常開閉。

GJB3基因突變可導致顯性或隱性遺傳性非綜合征性耳聾。初步的功能學研究結果揭示了GJB2基因編碼的Cx26與GJB3基因編碼的Cx31的相互作用及其雙基因的解剖、生理和功能學基礎。GJB3基因與GJB2基因雖然不在同一條染色體上，但都編碼連接蛋白，在內耳離子平衡中發揮作用，按照雙等位基因致聾的模式，有可能GJB2基因與GJB3基因共同導致耳聾患者的發病。

SLC26A4基因，或稱PDS基因，所制造的蛋白質為pendrin，是一個氯及碘離子的運輸蛋白。一般以為其在內耳中主要是扮演調節離子均衡與內淋巴液的作用，若發生突變，就會導致內耳發育畸形及聽障。SLC26A4基因屬于隱性遺傳，雙等位基因病理性突變會導致的遺傳性耳聾。此基因突變與大前庭水管綜合征和耳蝸畸形有非常密切的關系。

線粒體DNA突變易導致藥物性耳聾，發病過程中，部分患者對氨基糖甙類抗生素有易感性，即應用正常劑量或微量的藥物就可以造成患者聽力損失，這種易感性通常是母系遺傳。毛細胞線粒體損傷導致其產能功能喪失，是聽力損害的細胞學基礎。mtDNA是人體細胞質內的閉環DNA，全長為16569bp，編碼呼吸鏈中的13個關鍵酶亞單位,2個rRNA，22個tRNA。由于mtDNA無組蛋白保護，是裸露的，所以其突變較核基因高10-20倍。另外mtDNA不含內含子，部分區域還有基因重疊現象。因此mtDNA的任何突變都會累及到基因組中的某一個重要功能區。