[發(fā)明專利]一種檢測(cè)遺傳性耳聾易感基因突變的試劑盒

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201510054294.0
• 申請(qǐng)日: 2015-02-02
• 公開（公告）號(hào): CN104694629B
• 公開（公告）日: 2018-05-18
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 華琴;潘海波;邢楠楠
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 江蘇佰齡全基因生物醫(yī)學(xué)技術(shù)有限公司
• 主分類號(hào): C12Q1/6883
• 分類號(hào): C12Q1/6883
• 代理公司: 上海泰能知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所 31233
• 代理人: 黃志達(dá)

1.一種利用多重連接探針擴(kuò)增檢測(cè)遺傳性耳聾易感基因突變位點(diǎn)的試劑盒，包括檢測(cè)探針和通用引物；所述檢測(cè)探針為每一條短探針和一條長探針對(duì)應(yīng)一個(gè)突變位點(diǎn)；所述突變點(diǎn)為：

GJB2：299-300delAT、35delG；

GJB3：250G>A、538C>T、547G>A；

12SrRNA：1494C>T、1555A>G；

SLC26A4：707T>C、IVS7-2A>G、1174A>T、1226G>A、1229C>T、IVS15+5G>A、

1975G>C、2027T>A、2168A>G；

所述的短探針從5’端到3’端依次由通用上游引物序列和探針序列兩部分組成；所述的長探針從5’端到3’端依次為探針序列、非人類基因組序列和通用下游引物反向互補(bǔ)序列；

所述突變位點(diǎn)所對(duì)應(yīng)的短探針依次分別為：

GJB2：SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2；

GJB3：SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5；

12SrRNA：SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7；

SLC26A4：SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:16；

所述突變位點(diǎn)所對(duì)應(yīng)的長探針5’端的探針序列依次分別為：

GJB2：SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:18；

GJB3：SEQ ID NO:19、SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:21；

12SrRNA：SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:23；

SLC26A4：SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:28、SEQ ID NO:29、SEQ ID NO:30、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:32；

所述的短探針從5’端到3’端依次由通用上游引物序列和探針序列兩部分組成；所述的長探針從5’端到3’端依次為探針序列、非人類基因組序列和通用下游引物反向互補(bǔ)序列；所述通用引物為非人類基因組序列SEQ ID NO:33和SEQ ID NO:34。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述的短探針由人工合成或PCR方法制備。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包括陽性DNA模板、DNA雜交液、DNA連接酶、連接緩沖溶液和PCR反應(yīng)試劑中的一種或多種。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的試劑盒，其特征在于，所述的DNA雜交液是與檢測(cè)探針配合的、和提取的基因組DNA或者陽性DNA模板一起進(jìn)行雜交反應(yīng)的溶液；所述的連接緩沖溶液是與DNA連接酶配合進(jìn)行連接反應(yīng)的溶液；PCR反應(yīng)試劑是以所述的連接反應(yīng)滅活連接酶后的產(chǎn)物為模板進(jìn)行多重PCR擴(kuò)增反應(yīng)的試劑組合。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的試劑盒，其特征在于，所述的PCR反應(yīng)試劑包括DNA聚合酶、PCR反應(yīng)緩沖溶液、dNTPs、和鎂離子中的一種或多種。

6.權(quán)利要求1所述多重連接探針擴(kuò)增檢測(cè)試劑盒在非診斷非治療領(lǐng)域的應(yīng)用。