[發(fā)明專利]石墨烯/類過氧化物酶雙信號(hào)放大檢測(cè)白血病的生物傳感方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201510053919.1
• 申請(qǐng)日: 2015-02-02
• 公開（公告）號(hào): CN104597240A
• 公開（公告）日: 2015-05-06
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 趙永祥;蘇婧;盧小玲;黃勇
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 廣西醫(yī)科大學(xué)
• 主分類號(hào): G01N33/574
• 分類號(hào): G01N33/574;G01N33/553
• 代理公司: 北京紀(jì)凱知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11245
• 代理人: 關(guān)暢

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物傳感器的醫(yī)學(xué)基礎(chǔ)應(yīng)用領(lǐng)域，涉及一種石墨烯/類過氧化物酶雙信號(hào)放大檢測(cè)白血病的生物傳感方法。

背景技術(shù)

白血病是一類常見和多發(fā)的造血干細(xì)胞克隆性惡性疾病，是我國(guó)十大高發(fā)惡性腫瘤之一，居35歲以下人群惡性腫瘤死亡率的首位，其發(fā)病率有逐年增高的趨勢(shì)。其診斷分型最初是1976年由法(F)、美(A)、英(B)協(xié)作組提出的FAB分類，它是診斷白血病的傳統(tǒng)方法。隨著細(xì)胞遺傳學(xué)和免疫分型在白血病診斷中的應(yīng)用，又提出了白血病的細(xì)胞形態(tài)學(xué)(Morphoiogic)、免疫學(xué)(Immunologic)、細(xì)胞遺傳學(xué)(Cytogentic)MIC分型。20世紀(jì)80年代以來(lái)，由于MIC亞型特征性染色體異常受累基因的克隆及對(duì)這些基因功能的不斷剖析，又逐漸形成了基于細(xì)胞形態(tài)學(xué)、免疫學(xué)、細(xì)胞遺傳學(xué)、分子生物學(xué)(Molecular)的MIC-M分型。近年來(lái)，隨著細(xì)胞遺傳學(xué)、分子生物學(xué)技術(shù)的飛速發(fā)展，染色體分析、Southern-Blot、RT-PCR及FISH等技術(shù)被用于白血病的臨床診斷。然而這些方法仍存在較多缺點(diǎn)，如檢測(cè)方法復(fù)雜、放射性污染、靈敏度低、測(cè)試費(fèi)用昂貴等，因此，在臨床診斷中，形態(tài)學(xué)檢測(cè)及抗原-抗體特異性識(shí)別的免疫學(xué)表型檢測(cè)仍是白血病診斷的基礎(chǔ)。但單純依靠形態(tài)學(xué)檢查很難進(jìn)行準(zhǔn)確的分型診斷，而免疫學(xué)表型檢測(cè)需要相應(yīng)的抗體，并且操作繁瑣，價(jià)格昂貴，因此，發(fā)展新的快速、靈敏、經(jīng)濟(jì)的白血病檢測(cè)新方法具有非常重要的臨床意義。

近年來(lái)，納米技術(shù)迅速發(fā)展并滲透于醫(yī)學(xué)領(lǐng)域，為腫瘤的早期診斷帶來(lái)曙光。美國(guó)國(guó)立衛(wèi)生研究院于2005年啟動(dòng)了“癌癥納米技術(shù)計(jì)劃”，旨在將納米技術(shù)、癌癥研究與分子生物醫(yī)學(xué)相互結(jié)合，實(shí)現(xiàn)減輕癌癥病人痛苦和降低死亡率的目標(biāo)。石墨烯(graphene)是一種通過sp2雜化組成的碳二維納米結(jié)構(gòu)，是所有其他維度(如零維富勒烯、一維碳納米管、三維石墨等)碳質(zhì)材料的基本構(gòu)造單元。它具有獨(dú)特的納米結(jié)構(gòu)和熱、機(jī)械及電學(xué)屬性，如比表面積大、表面反應(yīng)活性高、催化效率高、吸附能力強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn)，特別適用于敏感分子的固定、信號(hào)的傳感和放大。血紅素是一種鐵卟啉配合物，為人體內(nèi)血紅蛋白的核心，由于其價(jià)格低廉，性質(zhì)穩(wěn)定以及可以催化氧氣、過氧化氫等的還原而被廣泛應(yīng)用，但其催化活性和電化學(xué)穩(wěn)定性并不令人滿意。通過Hemin與石墨烯之間π-π相互作用制備的Hemin功能化石墨烯納米雜化材料(HGNs)在水溶液中具有很好的穩(wěn)定性，石墨烯表面附著的血紅素使得HGNs具有過氧化氫酶的性質(zhì)，而石墨烯能提高Hemin的催化活性及穩(wěn)定性。因此，HGNs可作為一種具有過氧化物酶催化活性的納米材料應(yīng)用于生物傳感器的制備中，而將HGNs應(yīng)用于腫瘤細(xì)胞的檢測(cè)尚未見報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種用于白血病細(xì)胞檢測(cè)的試劑盒。

本發(fā)明所提供的用于白血病細(xì)胞檢測(cè)的試劑盒，含有如下(a)和(b)：

(a)磁珠捕獲探針；

所述磁珠捕獲探針由磁珠和固定于所述磁珠上的捕獲探針組成；所述捕獲探針為序列表中序列1所示的單鏈DNA分子；

(b)適配體功能化Hemin-石墨烯復(fù)合納米材料；

所述適配體功能化Hemin-石墨烯復(fù)合納米材料由經(jīng)氯化高鐵血紅素(Hemin)修飾的石墨烯和固定于所述經(jīng)氯化高鐵血紅素修飾的石墨烯上的適配體探針組成；所述適配體探針為序列表中序列2所示的單鏈DNA分子。

在所述試劑盒中，所述適配體功能化Hemin-石墨烯復(fù)合納米材料具體可按照包括如下步驟的方法制備得到：按照所述經(jīng)氯化高鐵血紅素修飾的石墨烯與所述適配體探針的配比為0.5mg：4-40nmol(如1mg：8nmol)的比例，將所述經(jīng)氯化高鐵血紅素修飾的石墨烯的懸濁液與所述適配體探針的溶液混合，20-25℃(如25℃)避光孵育16-24h(如24h)，得到所述適配體功能化Hemin-石墨烯復(fù)合納米材料。

其中，所述經(jīng)氯化高鐵血紅素修飾的石墨烯的懸濁液中，所述經(jīng)氯化高鐵血紅素修飾的石墨烯的含量為1mg/ml。所述適配體探針的溶液中，所述適配體探針的濃度為8μM。

在進(jìn)行所述20-25℃避光孵育16-24h(如24h)的期間，還包括向孵育體系中加入NaCl，至所述NaCl的終濃度為10mM的步驟。

其中，所述向孵育體系中加入NaCl為向所述孵育體系中逐次加入NaCl；具體為：每次0.5μL?NaCl溶液(濃度為1M)，每5個(gè)小時(shí)加一次。

在所述試劑盒中，所述經(jīng)氯化高鐵血紅素修飾的石墨烯是將氧化石墨烯和氯化高鐵血紅素按照質(zhì)量比為1：(1～10)(如1:1)的比例制備得到的。