[發明專利]用于抗微生物劑抗性測定的方法

有效

• 申請號: 201510053811.2
• 申請日: 2010-05-06
• 公開（公告）號: CN104655840B
• 公開（公告）日: 2018-03-23
• 發明（設計）人: 約翰·沃爾什;瓊斯·海曼
• 申請（專利權）人: 生物梅里埃有限公司
• 主分類號: C12Q1/04
• 分類號: C12Q1/04
• 代理公司: 北京安信方達知識產權代理有限公司11262
• 代理人: 李平,鄭霞

本申請是申請號為“201080028598.5”，申請日為“2010年5月6日”，發明名稱為“用于抗微生物劑抗性測定的方法”的申請的分案申請。

相關申請的交叉引用

本申請要求于2009年5月7日提交的標題為“Methods for Antimicrobial Resistance Determination(用于抗微生物劑抗性測定的方法)”的美國臨時專利申請第61/215,594號的權益，其在本文中并入。

發明領域

本發明涉及用于測定微生物的抗生素抗性狀況的方法和系統。本發明還提供了用于在單個系統內原位測定微生物的抗生素抗性狀況的方法。

發明背景

血流感染伴有高發病率和高死亡率，然而目前的診斷方法：培養、隨后生化鑒定和抗生素敏感性檢驗，可需要數天來進行。通常，基于臨床癥狀啟動經驗療法，且檢驗結果僅在起始療法失敗時影響臨床決策。陽性血液培養結果之后1小時內鑒定血流感染的能力將顯著地提高所提供的診斷信息的臨床相關性。已提出了分子擴增方法來滿足該需求，但對于該方法存在嚴重的挑戰。陽性血液培養物肉湯本身代表具有用于多種快速鑒定(ID)檢驗的可能性的微生物的天然擴增群體。

甲氧西林抗性的金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)(MRSA)是可以甚至在健康患者中快速導致感染的危險的社區獲得性和醫院獲得性病原體。其也常作為正常菌群存在于大量年老的和患病的患者中，并在健康護理環境中具有快速交叉感染多個患者的能力。“甲氧西林抗性”的機制基本上由稱作PBP2a的改變的青霉素結合蛋白2的產生來介導，其保留了功能性酶活性但對于β-內酰胺抗生素具有顯著降低的親和力。萬古霉素抗性腸球菌(enterococci)(VRE)是需要立即鑒定的另一組危險的病原體。以與甲氧西林抗性相似的方式，萬古霉素抗性也是由抗生素對其細胞膜靶標的降低的親和力來介導。

目前鑒定MRSA和VRE的方法是勞動強度大的且由于可能導致使用者的氣溶膠暴露的步驟而可能是不安全的。迫切需要快速且安全和可靠的方法以分離血液培養物肉湯中所含的微生物，其適合快速測定抗性。本發明提供了這樣的方法。

發明概述

本發明提供了用于測定微生物的抗生素抗性狀況的方法。該方法允許比現有技術更快地測定微生物的抗生素抗性狀況，導致更快的診斷(例如，在患有或懷疑患有敗血癥和/或其他感染的受試者中)和受污染物質(例如，食品、供水和藥品)的表征。包括在本發明方法中的步驟——從獲得樣品至微生物的抗生素抗性狀況的測定，可在非常短的時間范圍中進行以產生臨床相關的可操作的信息，例如，在少于約240分鐘之內。此外，本發明的方法可以完全自動化，從而降低了操作傳染性材料的風險和/或污染樣品的風險。

本發明的第一方面涉及測定微生物的抗生素抗性狀況的方法，包括：

(a)在可形成微生物/抗性測定親和配體復合物的條件下，將微生物與抗性測定親和配體相接觸；

(b)將(a)中形成的微生物/抗性測定親和配體復合物與未結合的抗性測定親和配體相分離；

(c)測定微生物/抗性測定親和配體復合物中與微生物結合的抗性測定親和配體的量；和

(d)將微生物/抗性測定親和配體復合物中與微生物結合的抗性測定親和配體的量與被同樣的微生物的已知的抗生素敏感性或抗生素抗性菌株或已知的抗生素敏感性或抗生素抗性菌株的群體所結合的抗性測定親和配體的量相比較；

其中如果微生物/抗性測定親和配體復合物中的微生物結合的抗性測定親和配體的量與被抗生素敏感性微生物結合的抗性測定親和配體的量不同，或微生物/抗性測定親和配體復合物中的微生物結合的抗性測定親和配體的量與被抗生素敏感性微生物結合的抗性測定親和配體的量相同，那么將該微生物鑒定為抗生素抗性的。

在一些實施方案中，步驟(a)、(b)、(c)和/或(d)中的一個或多個可以在密封的容器中進行。

在一些實施方案中，所述抗性測定親和配體可選自由以下組成的組：抗生素，單克隆抗體和多克隆抗體及其片段，核酸探針，酶底物，適體，肽模擬物，噬菌體來源的結合蛋白，凝集素，宿主防御肽，細菌素，噬菌體，對核酸、脂質、碳水化合物、多糖、蛋白選擇性的染料，和其組合。

在一些實施方案中，所述抗性測定親和配體可以是抗生素。

在一些實施方案中，所述抗性測定親和配體可以是β-內酰胺抗生素或糖肽抗生素。