[發(fā)明專利]用于抗微生物劑抗性測(cè)定的方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201510053811.2
• 申請(qǐng)日: 2010-05-06
• 公開（公告）號(hào): CN104655840B
• 公開（公告）日: 2018-03-23
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 約翰·沃爾什;瓊斯·海曼
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 生物梅里埃有限公司
• 主分類號(hào): C12Q1/04
• 分類號(hào): C12Q1/04
• 代理公司: 北京安信方達(dá)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司11262
• 代理人: 李平,鄭霞

1.一種用于測(cè)定微生物的抗生素抗性狀況的方法，所述方法包括：

(a)獲得已知含有微生物或可能含有微生物的檢驗(yàn)樣品；

(b)在可形成微生物/抗性測(cè)定親和配體復(fù)合物的條件下使所述檢驗(yàn)樣品中的微生物與抗性測(cè)定親和配體相接觸；

(c)任選地添加測(cè)量細(xì)胞新陳代謝或膜完整性的一種或更多種熒光染料；

(d)任選地選擇性地裂解可能存在于所述樣品中的任何非微生物細(xì)胞以產(chǎn)生裂解的樣品；

(e)將所述微生物/抗性測(cè)定親和配體復(fù)合物在容器中的密度墊層上分層并離心所述容器以將(b)中形成的所述微生物/抗性測(cè)定親和配體復(fù)合物與未結(jié)合的抗性測(cè)定親和配體分離以形成包含微生物的沉淀物；

(f)通過光譜學(xué)探測(cè)所述沉淀物以產(chǎn)生所述微生物的測(cè)量結(jié)果，其中所述光譜學(xué)包括測(cè)定在檢測(cè)所述微生物的內(nèi)在性質(zhì)的波長處的激發(fā)-發(fā)射矩陣(EEM)；

(g)通過將所述測(cè)量結(jié)果與針對(duì)同種的抗生素抗性和/或抗生素敏感性微生物所取得或預(yù)測(cè)的測(cè)量結(jié)果相比較而測(cè)定所述檢驗(yàn)樣品中的微生物的抗生素抗性狀況，其中所述方法在少于240分鐘的時(shí)間內(nèi)進(jìn)行。

2.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述抗性測(cè)定親和配體選自由以下組成的組：抗生素，單克隆抗體和多克隆抗體及其片段，核酸探針，酶底物，適體，肽模擬物，噬菌體來源的結(jié)合蛋白，凝集素，宿主防御肽，細(xì)菌素，噬菌體，對(duì)核酸、脂質(zhì)、碳水化合物、多糖、蛋白選擇性的染料，和其組合。

3.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述抗性測(cè)定親和配體是抗生素。

4.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述抗性測(cè)定親和配體是β-內(nèi)酰胺抗生素或糖肽抗生素。

5.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述密度墊層包括以下物質(zhì)的一種或更多種的任何組合：顯微鏡浸油、礦物油、硅油、硅凝膠、膠態(tài)二氧化硅、碘化造影劑、蔗糖、甲泛影酸鹽-泛影酸鹽-葡聚糖、羧甲基纖維素、羥丙基甲基纖維素、具有高分子量的聚氧化乙烯、F127、F68、聚丙烯酸、交聯(lián)的聚乙烯醇、交聯(lián)的聚乙烯吡咯烷、PEG甲醚甲基丙烯酸酯、果膠、瓊脂糖、黃原膠、吉蘭糖、山梨糖醇、甘油、葡聚糖、糖原、氯化銫、全氟化碳液體、和/或氫氟碳液體。

6.如權(quán)利要求5所述的方法，其中所述硅油是氟硅油。

7.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述密度墊層具有約1.025g/ml至約1.120g/ml的密度。

8.如權(quán)利要求1所述的方法，其中步驟(b)在容器中進(jìn)行并且其中所述容器包括在所述容器的底部、頂部和/或一個(gè)或更多個(gè)側(cè)部的光學(xué)窗口，并且其中所述光學(xué)窗口可透過近紅外光譜、紫外光譜和/或可見光譜中的至少一部分。

9.如權(quán)利要求1所述的方法，其中步驟(g)中的所述抗生素抗性測(cè)定被測(cè)定為誘導(dǎo)的抗性。

10.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述光譜學(xué)是正面熒光光譜學(xué)。

11.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述EEM包括至少兩種不同的波長。

12.如權(quán)利要求1所述的方法，其中步驟(g)包括將所述微生物結(jié)合的抗性測(cè)定親和配體的量與被同樣的微生物的抗生素敏感性和抗生素抗性菌株二者所結(jié)合的抗性測(cè)定親和配體的量相比較。

13.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述步驟(g)包括將所述微生物/抗性測(cè)定親和配體復(fù)合物中的所述抗性測(cè)定親和配體對(duì)完整的微生物的結(jié)合親和力與所述抗性測(cè)定親和配體對(duì)同樣的微生物的已知的抗生素敏感性或抗生素抗性菌株或已知的抗生素敏感性或抗生素抗性菌株的群體的結(jié)合親和力相比較。