[發(fā)明專利]一種復染環(huán)境下細胞DNA定量測量方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201510052983.8
• 申請日: 2015-02-02
• 公開（公告）號: CN104614332B
• 公開（公告）日: 2017-05-10
• 發(fā)明（設計）人: 張澤蘭;曾莉婭
• 申請（專利權）人: 武漢呵爾醫(yī)療科技發(fā)展有限公司
• 主分類號: G01N21/31
• 分類號: G01N21/31;G01N1/30
• 代理公司: 北京挺立專利事務所(普通合伙)11265
• 代理人: 王震秀

1.一種復染環(huán)境下細胞DNA定量測量方法，其特征在于，該方法包括以下步驟：

步驟a、將載有脫落細胞的玻片用多種單一純染料分別染色；

步驟b、對未放入染色玻片的多光譜成像系統(tǒng)先進行多光譜成像，獲得入射光強度的光譜圖像Io(λ)，其中λ為光波長；

步驟c、再依次插入純染料染色的玻片獲取光譜圖像I(λ)，據(jù)此計算出染料的吸光度x_i(λ)＝log(Io(λ)/I(λ))；

步驟d、重復步驟c，測量出所有染料的吸光度圖像x_i(λ)，然后綜合成敏感度矩陣X，X＝[x₁，x₂，……x_n]；其中，i＝1–n,n為染料的總數(shù)；

步驟e、計算得到模型M＝(X^tX)^-1X^t；其中，X代表矩陣，X^t代表將該矩陣轉置，X^-1代表將該矩陣求逆；

步驟f、用步驟a中的所有染料一起復染待分析細胞，將載有染好的待分析細胞的玻片置于顯微鏡下，用多光譜成像系統(tǒng)測出它的吸收光譜圖像y(λ)，y＝[y₁,y₂,……y_n]，然后依據(jù)公式c＝My計算出染料的相對濃度，c＝(c₁,c₂,c₃,……c_n)，為染料待測量的濃度；

染色前細胞核內DNA經稀酸水解后產生具有還原作用的醛基，所述醛基與福爾根染料結合，福爾根染料的濃度正比于細胞核的DNA含量，從而根據(jù)福爾根染料的濃度計算得出細胞核內的DNA含量。

2.如權利要求1所述的一種復染環(huán)境下細胞DNA定量測量方法，其特征在于，所述多光譜成像系統(tǒng)的光譜段大于或等于染料數(shù)目，以便計算出染料的相對濃度。

3.如權利要求2所述的一種復染環(huán)境下細胞DNA定量測量方法，其特征在于，所述多光譜成像系統(tǒng)的光譜段采用480nm-680nm的光譜段。

4.如權利要求3所述的一種復染環(huán)境下細胞DNA定量測量方法，其特征在于，在設定的光譜段的基礎上，光譜圖像采集間隔為10-100nm。

5.如權利要求1至4任一項所述的一種復染環(huán)境下細胞DNA定量測量方法，其特征在于，所述多光譜成像系統(tǒng)，包括物鏡、成像鏡、攝像機和計算機，在所述物鏡和成像鏡之間的光路上安裝有電調諧濾光器。

6.如權利要求5所述的一種復染環(huán)境下細胞DNA定量測量方法，其特征在于，所述攝像機安置在成像鏡的后端，并且所述攝像機的成像數(shù)據(jù)與所述計算機對接。

7.如權利要求6所述的一種復染環(huán)境下細胞DNA定量測量方法，其特征在于，還包括控制器，用以控制所述電調諧濾光器在所述物鏡和所述成像鏡之間的光路上的位置。

8.如權利要求7所述的一種復染環(huán)境下細胞DNA定量測量方法，其特征在于，所述控制器與所述計算機對接，并接受所述計算機的指令，進而控制所述電調諧濾光器的動作。

9.如權利要求1至4，6至8任一項所述的一種復染環(huán)境下細胞DNA定量測量方法，其特征在于，步驟a、步驟b的先后順序可調。

10.如權利要求1至4，6至8任一項所述的一種復染環(huán)境下細胞DNA定量測量方法，其特征在于，還包括應用所述方法剝離福爾根染色和巴氏染色的步驟。