[發(fā)明專利]一種復(fù)染環(huán)境下細(xì)胞DNA定量測(cè)量方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201510052983.8
• 申請(qǐng)日: 2015-02-02
• 公開（公告）號(hào): CN104614332B
• 公開（公告）日: 2017-05-10
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張澤蘭;曾莉婭
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 武漢呵爾醫(yī)療科技發(fā)展有限公司
• 主分類號(hào): G01N21/31
• 分類號(hào): G01N21/31;G01N1/30
• 代理公司: 北京挺立專利事務(wù)所(普通合伙)11265
• 代理人: 王震秀

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及脫落細(xì)胞涂片檢查方法，尤其是涉及多光譜顯微成像及細(xì)胞成分定量分析方法，屬于細(xì)胞染色成像技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)

宮頸癌是婦科高發(fā)的惡性腫瘤之一，對(duì)宮頸癌及癌變的早期診斷是提高宮頸癌治愈率及生存率的關(guān)鍵。目前我國(guó)最常用的宮頸癌篩查方法是TBS分類法，癌癥早期診斷需要從上萬(wàn)個(gè)細(xì)胞中挑選少數(shù)幾個(gè)癌變的細(xì)胞，這種方法需要醫(yī)生來(lái)進(jìn)行長(zhǎng)時(shí)間人工閱片篩查，極大的增加醫(yī)生的工作強(qiáng)度和人為誤差。

用細(xì)胞DNA圖像定量分析診斷方法進(jìn)行宮頸癌前病變的診斷已有大量報(bào)道，在北美及歐洲細(xì)胞DNA圖像定量分析診斷方法已作為一種常規(guī)臨床檢測(cè)方法之一。在國(guó)內(nèi)，許多大城市也開始用全自動(dòng)DNA定量分析系統(tǒng)進(jìn)行宮頸癌篩查。許多研究表明，細(xì)胞DNA定量分析診斷方法在早期診斷方面具有更大優(yōu)勢(shì)。

目前有兩種方法來(lái)結(jié)合TBS和DNA定量檢查。

一種是將細(xì)胞涂片先做DNA染色，用全自動(dòng)DNA圖像定量分析系統(tǒng)進(jìn)行宮頸癌篩查，找到可以得癌細(xì)胞后，將DNA染色再用化學(xué)試劑褪色，然后再做巴氏染色復(fù)染，方便醫(yī)生直接復(fù)查檢查出的癌細(xì)胞。缺點(diǎn)是操作復(fù)雜，找到的癌細(xì)胞有可能在褪色過(guò)程中脫落。

另外一種方法是做2張細(xì)胞涂片，一張巴氏染色做TBS分類，一張福爾根(Feulgen)染色應(yīng)用全自動(dòng)DNA定量分析系統(tǒng)做DNA含量測(cè)定，臨床應(yīng)用中可一次取材，同時(shí)制片，不同染色，兩種技術(shù)同時(shí)檢測(cè)，可實(shí)現(xiàn)優(yōu)勢(shì)互補(bǔ)，能顯著提高診斷準(zhǔn)確率。缺點(diǎn)是DNA定量分析系統(tǒng)找出的異常細(xì)胞，醫(yī)生無(wú)法通過(guò)熟悉的細(xì)胞形態(tài)來(lái)進(jìn)行TBS分類。醫(yī)生還必須仔細(xì)重新檢查另外一張巴氏染色的載玻片，搜索癌變細(xì)胞進(jìn)行確認(rèn)。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明提出了一種復(fù)染環(huán)境下細(xì)胞DNA定量測(cè)量方法，可以同時(shí)進(jìn)行細(xì)胞DNA定量和細(xì)胞形態(tài)定量分析；同時(shí)在儀器DNA定量掃描找出的癌細(xì)胞后，醫(yī)生可方便的在原位進(jìn)行醫(yī)生熟悉的脫落細(xì)胞TBS復(fù)查。

本發(fā)明的目的通過(guò)以下技術(shù)方案來(lái)具體實(shí)現(xiàn)：

一種復(fù)染環(huán)境下細(xì)胞DNA定量測(cè)量方法，包括以下步驟：

步驟a、將載有脫落細(xì)胞的玻片用多種單一純?nèi)玖戏謩e染色；

步驟b、對(duì)未放入染色玻片的多光譜成像系統(tǒng)先進(jìn)行多光譜成像，獲得入射光強(qiáng)度的光譜圖像Io(λ)，其中λ為光波長(zhǎng)；

步驟c、再依次插入純?nèi)玖先旧牟Ｆ@取光譜圖像I(λ)，據(jù)此計(jì)算出染料的吸光度x_i(λ)＝log(Io(λ)/I(λ))；

步驟d、重復(fù)步驟c，測(cè)量出所有染料的吸光度圖像x_i(λ)，然后綜合成敏感度矩陣X，X＝[x₁，x₂，……x_n]，；

步驟e、計(jì)算得到模型M＝(X^tX)^-1X^t；

步驟f、用步驟a中的所有染料一起復(fù)染待分析細(xì)胞，將載有染好的待分析細(xì)胞的玻片置于顯微鏡下，用多光譜成像系統(tǒng)測(cè)出它的吸收光譜圖像y(λ)，依據(jù)公式c＝My計(jì)算出染料的相對(duì)濃度，c＝(c₁,c₂,c₃,……c_n)，為染料待測(cè)量的濃度；染色前細(xì)胞核內(nèi)DNA經(jīng)稀酸水解后產(chǎn)生具有還原作用的醛基，所述醛基與福爾根染料結(jié)合，福爾根染料的濃度正比于細(xì)胞核的DNA含量，從而根據(jù)福爾根染料的濃度計(jì)算得出細(xì)胞核內(nèi)的DNA含量。

所述多光譜成像系統(tǒng)的光譜段大于或等于染料數(shù)目，以便計(jì)算出染料的相對(duì)濃度。

所述多光譜成像系統(tǒng)的光譜段采用480nm-680nm的光譜段。

在設(shè)定的光譜段的基礎(chǔ)上，光譜圖像采集間隔為10-100nm。

所述多光譜成像系統(tǒng)，包括物鏡、成像鏡、攝像機(jī)和計(jì)算機(jī)，在所述物鏡和成像鏡之間的光路上安裝有電調(diào)諧濾光器。

所述攝像機(jī)安置在成像鏡的后端，并且所述攝像機(jī)的成像數(shù)據(jù)與所述計(jì)算機(jī)對(duì)接。

進(jìn)一步的，所述多光譜成像系統(tǒng)還包括控制器，用以控制所述電調(diào)諧濾光器在所述物鏡和所述成像鏡之間的光路上的位置。

所述控制器與所述計(jì)算機(jī)對(duì)接，并接受所述計(jì)算機(jī)的指令，進(jìn)而控制所述電調(diào)諧濾光器的動(dòng)作。

用本發(fā)明提出的方法可以剝離福爾根染色和巴氏染色。可以同時(shí)進(jìn)行細(xì)胞DNA定量和細(xì)胞形態(tài)定量分析；同時(shí)在儀器DNA定量掃描后找出的癌細(xì)胞，醫(yī)生可方便的在原位進(jìn)行醫(yī)生熟悉的脫落細(xì)胞TBS復(fù)查。

附圖說(shuō)明