[發明專利]一種人附睪蛋白免疫檢測試劑盒及其使用方法

有效

• 申請號: 201510051622.1
• 申請日: 2015-01-31
• 公開（公告）號: CN104597235B
• 公開（公告）日: 2017-03-29
• 發明（設計）人: 姚建林;葛明;房聰維;田中群
• 申請（專利權）人: 蘇州大學
• 主分類號: G01N33/532
• 分類號: G01N33/532;G01N33/68
• 代理公司: 蘇州創元專利商標事務所有限公司32103
• 代理人: 陶海鋒

技術領域

本發明涉及一種人附睪蛋白免疫檢測試劑盒及其使用方法，屬于生物材料及檢測技術領域。

背景技術

卵巢癌是婦科常見的惡性腫瘤，也是婦科腫瘤死亡率最高的腫瘤類型。目前，卵巢癌的診斷主要依據兩種檢測手段。一種是經陰道超聲檢查（TUV），這種成像方法可用于檢查女性的生殖器官，包括子宮、卵巢、宮頸及陰道。盡管其應用較為普遍，但是這種方法并不能準確檢測出腫塊是良性還是惡性。此外，該方法還需要經驗豐富的臨床技師對檢測結果進行解讀。另一種常規檢測方法是檢測生物標志物CA125（carbohydrate?antigen?125），這種方法被視為卵巢癌診斷的“金標準”。但是，CA125的特異性及敏感度較低，容易出現假陰性或假陽性。大約50%的卵巢癌I期患者并沒有CA125水平升高的現象，也就是說有一半的卵巢癌患者可能被漏診。某些良性卵巢疾病也會導致CA125水平升高，造成假陽性。因此，在臨床診斷上亟需一種更好的診斷標志物及檢測工具以盡早診斷卵巢癌。人附睪蛋白4（HE4）是一種新的腫瘤標志物，88%的卵巢癌患者都會出現HE4升高的現象，其可用于卵巢癌的早期診斷、鑒別、治療監測及預后評估。與CA125相比，HE4的敏感度更高、特異性更強，尤其是在疾病初期無癥狀階段，疾病早期HE4診斷的敏感度是82.7%，而CA125卻僅有45.9%。與CA125較低的特異性相比，HE4的特異性高達99%。這意味著，臨床醫生對HE4的檢測結果會更具信心。

因此，如何對HE4進行快速有效的高靈敏檢測成為研究熱點，目前HE4的檢測方法主要為生物酶聯法(參見文獻：S.?Wang,?X.?Zhao,?I.?Khimji,?R.?Akbas,?W.?Qiu,?D.?Edwards,?D.?W.?Cramer,?B.?Ye,?U.?Demirci,?Lab?Chip.?2011,?11,?3411.)及電化學發光免疫檢測（參見文獻：J.?J.?Yang,?M.?Sa,?M.?Huang,?J.?J.?Yang,?Z.?Y.?Xiang,?B.?Liu,?A.?G.?Tang,?Clin?Biochem.?2013,?46,?1705.），然而這些技術或多或少都存在著缺陷，譬如樣品準備繁瑣，檢測時間長以及檢測靈敏度并不高等，目前這兩種方法的檢測限大約在10?pg.ml^-1水平（參見文獻：F.?Plotti,?S.?Capriglione,?C.?Terranova,?R.?Montera,?A.?Aloisi,?P.?Damiani,?L.?Muzii,?G.?Scaletta,?P.?Benedetti-Panici,?R.?Angioli,?Tumor?Biology.?2012,?33,?2117.），而疾病早期時HE4濃度極低，這就對HE4抗原的高靈敏準確檢測提出了挑戰。表面增強拉曼光譜（SERS）是一種具有極高靈敏度的檢測表面物種信息的光譜技術，其在貴金屬Au、Ag、Cu上的增強可達10⁶倍以上。自1974年Fleischmann在粗糙銀電極上獲得了吡啶吸附的高質量拉曼光譜以來(參見文獻：S?M.?Fleischmann,?P.?J.?Hendra,?A.?J.?McQuillan,?Chem.?Phys.?Lett.?1974,?26,?163.)，ERS在表面科學中迅速崛起，目前在生物醫學、食品衛生、催化等各領域都得到了廣泛的應用。同時，金包覆的鐵氧化物功能性核殼納米粒子（鐵氧化物@Au）兼具內核鐵氧化物的強順磁性和外層Au的高SERS活性，已成為理想的SERS基底材料，利用其有效的磁富集作用進行現場極低濃度物質的檢測具有極大的潛力。

發明內容

本發明的目的是針對現有人附睪蛋白檢測存在的靈敏度較低的不足，提供一種基于表面增強拉曼光譜及磁性能的復合磁性材料實現人附睪蛋白的高靈敏檢測的試劑盒及其使用方法。通過SERS技術使檢測限達到飛克級水平，并實現了磁性免疫復合納米粒子的循環使用。

為達到上述發明目的，本發明采用的技術方案是：一種人附睪蛋白免疫檢測試劑盒，它的有效成分包括按體積比為1:1的標記免疫金納米粒子試劑和Fe₃O₄@Au免疫納米粒子試劑；