[發明專利]一種人附睪蛋白免疫檢測試劑盒及其使用方法

有效

• 申請號: 201510051622.1
• 申請日: 2015-01-31
• 公開（公告）號: CN104597235B
• 公開（公告）日: 2017-03-29
• 發明（設計）人: 姚建林;葛明;房聰維;田中群
• 申請（專利權）人: 蘇州大學
• 主分類號: G01N33/532
• 分類號: G01N33/532;G01N33/68
• 代理公司: 蘇州創元專利商標事務所有限公司32103
• 代理人: 陶海鋒

1.一種人附睪蛋白免疫檢測試劑盒，其特征在于它的有效成分包括按體積比為1:1的標記免疫金納米粒子試劑和Fe₃O₄@Au免疫納米粒子試劑；

所述的標記免疫金納米粒子的制備方法為：制備質量體積比為0.6%～1%的粒徑為35～50?nm的金納米粒子分散液，取濃度為1mmol/l的4-巰基苯甲酸標記分子2?μl加入到1?ml的金納米粒子分散液中，離心分散后，按摩爾比2～5:1，依次加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽和N-羥基琥珀酰亞胺，進行表面羧基活化處理后，注入人附睪蛋白抗體，孵育2～3?h，再進行離心分散,加入牛血清白蛋白封閉剩下的活性位，得到標記免疫金納米粒子試劑；

所述的核殼結構Fe₃O₄@Au免疫納米粒子的制備方法為：制備質量體積比為15～20%的Fe₃O₄分散液，取濃度為1mmol/l的氨丙基三甲基硅烷?90～100?μl加入到1?ml的Fe₃O₄分散液中，得到表面氨基化修飾的Fe₃O₄；按質量比5～10:1,將粒徑為2～5nm的金納米粒子加入到表面氨基化修飾的Fe₃O₄分散液中混合，得到Fe₃O₄-?Au納米復合物；利用種子生長法制備得到Fe₃O₄@Au核殼納米粒子；注入濃度為5mg/ml的人附睪蛋白抗體8～10μl，得到核殼結構Fe₃O₄@Au免疫納米粒子試劑。

2.如權利要求1所述的人附睪蛋白免疫檢測試劑盒的使用方法，其特征在于包括如下步驟：

（1）將標記免疫金納米粒子試劑、Fe₃O₄@Au免疫納米粒子試劑與待測抗原混合，組裝形成?“標記免疫金納米粒子-抗原-Fe₃O₄@Au免疫納米粒子”磁性復合夾心結構；

（2）將磁性復合夾心結構通過釹鐵硼磁鐵富集后轉移至載玻片，用于進行表面增強拉曼光譜檢測。

3.根據權利要求2所述的人附睪蛋白免疫檢測試劑盒的使用方法，其特征在于：以酸化甲醇溶液為解離劑，解離磁性復合夾心結構，實現免疫磁性納米粒子的循環使用。

4.根據權利要求3所述的人附睪蛋白免疫檢測試劑盒的使用方法，其特征在于：所述的酸化甲醇溶液，甲醇的質量濃度為25%，用HCl調節甲醇溶液的pH為2～3。