[發(fā)明專(zhuān)利]一種培養(yǎng)Marc?145細(xì)胞用的培養(yǎng)基及其制備方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201510050944.4
• 申請(qǐng)日: 2015-01-30
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN104630132B
• 公開(kāi)（公告）日: 2017-11-14
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 徐家華;陳瑞愛(ài);蔣春英;張東霞;王新秋
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 肇慶大華農(nóng)生物藥品有限公司;廣東溫氏大華農(nóng)生物科技有限公司
• 主分類(lèi)號(hào): C12N5/071
• 分類(lèi)號(hào): C12N5/071
• 代理公司: 廣州市越秀區(qū)哲力專(zhuān)利商標(biāo)事務(wù)所(普通合伙)44288
• 代理人: 羅偉添

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種培養(yǎng)基及其制備方法，具體涉及一種培養(yǎng)Marc-145細(xì)胞用的培養(yǎng)基及其制備方法。

背景技術(shù)

豬藍(lán)耳病又稱(chēng)“豬繁殖與呼吸障礙綜合征”，是由豬繁殖與呼吸障礙綜合征病毒引起，以成年豬生殖障礙、早產(chǎn)、流產(chǎn)和死胎，以及仔豬呼吸異常為特征的傳染病，是一種免疫抑制病，常常繼發(fā)其他病原感染。我國(guó)高致病性藍(lán)耳病的預(yù)防采用弱毒疫苗或者滅活疫苗進(jìn)行預(yù)防。在高致病性藍(lán)耳病病毒的滅活疫苗或者活疫苗生產(chǎn)過(guò)程需要培養(yǎng)Marc-145細(xì)胞。

現(xiàn)有的Marc-145細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中，通常需要加入8-10％的牛血清進(jìn)行培養(yǎng)，加入的牛血清較少，則會(huì)使得Marc-145細(xì)胞的生長(zhǎng)繁殖速度過(guò)慢。如公開(kāi)號(hào)為CN102002482A的發(fā)明專(zhuān)利申請(qǐng)文件，公開(kāi)了一種豬呼吸與繁殖障礙綜合征病毒的生產(chǎn)方法，其中公開(kāi)了細(xì)胞生長(zhǎng)液的配方：體積百分含量為90-92％的DMEM溶液、8-10％的牛血清、1％的雙抗、1％的谷氨酰胺；公開(kāi)號(hào)為CN101748101A的發(fā)明專(zhuān)利申請(qǐng)文件，公開(kāi)了一種豬繁殖與呼吸綜合征病毒的生產(chǎn)方法，其中公開(kāi)了生長(zhǎng)液為添加10％新生牛血清的DMEM培養(yǎng)液。胎牛血清價(jià)格較貴，在Marc-145細(xì)胞培養(yǎng)基中須要加入較多的量，使得疫苗生產(chǎn)成本變高，給生產(chǎn)企業(yè)和消費(fèi)者增加了負(fù)擔(dān)。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種牛血清用量少、Marc-145細(xì)胞生長(zhǎng)繁殖速度快的培養(yǎng)Marc-145細(xì)胞用的培養(yǎng)基及其制備方法。

為解決上述問(wèn)題，本發(fā)明所采用的技術(shù)方案如下：

一種培養(yǎng)Marc-145細(xì)胞用的培養(yǎng)基，其由如下成分組成：DMEM、酶解明膠溶液、氨基酸DMEM溶液和胎牛血清；所述DMEM、酶解明膠溶液、氨基酸DMEM溶液和胎牛血清的體積比為：酶解明膠溶液：氨基酸DMEM溶液：胎牛血清：DMEM＝1-2:1-5:2-5:100；

所述酶解明膠溶液中的蛋白質(zhì)濃度為20-80mg/ml，所述酶解明膠溶液中的溶劑為PBS溶液；

所述氨基酸DMEM溶液中的溶劑為DMEM，溶質(zhì)由按照質(zhì)量體積比計(jì)(此處的質(zhì)量體積比是指溶質(zhì)的組分質(zhì)量與氨基酸DMEM溶液體積之比)的如下組分組成：丙氨酸5-35mg/L、精氨酸10-60mg/L、天門(mén)冬酰胺5-25mg/L、天冬氨酸15-80mg/L、胱氨酸5-30mg/L、谷氨酸50-100mg/L、谷氨酰胺40-80mg/L、甘氨酸5-20mg/L、組氨酸5-10mg/L、異亮氨酸5-15mg/L、亮氨酸10-20mg/L、賴(lài)氨酸10-25mg/L、甲硫氨酸10-30mg/L、苯丙氨酸5-20mg/L、脯氨酸10-40mg/L、絲氨酸10-30mg/L、蘇氨酸10-40mg/L、色氨酸5-80mg/L、酪氨酸10-50mg/L、纈氨酸10-20mg/L、羥基脯氨酸5-10mg/L、高半胱氨酸2-10mg/L和牛磺酸5-15mg/L。

本發(fā)明中，優(yōu)選的方案為所述酶解明膠溶液為胰酶酶解明膠溶液，所述PBS溶液用超純水配制而成。

本發(fā)明中，優(yōu)選的方案為所述DMEM、酶解明膠溶液、氨基酸DMEM溶液和胎牛血清的體積比為：酶解明膠溶液：氨基酸DMEM溶液：胎牛血清：DMEM＝1-2:1-5:2-3:100。

本發(fā)明中，優(yōu)選的方案為所述DMEM、酶解明膠溶液、氨基酸DMEM溶液和胎牛血清的體積比為：酶解明膠溶液：氨基酸DMEM溶液：胎牛血清：DMEM＝1:2:2-5:100；

所述氨基酸DMEM溶液中的溶質(zhì)由按照質(zhì)量體積比計(jì)的如下組分：丙氨酸5mg/L、精氨酸10mg/L、天門(mén)冬酰胺5mg/L、天冬氨酸15mg/L、胱氨酸5mg/L、谷氨酸50mg/L、谷氨酰胺40mg/L、甘氨酸5mg/L、組氨酸5mg/L、異亮氨酸5mg/L、亮氨酸10mg/L、賴(lài)氨酸10mg/L、甲硫氨酸10mg/L、苯丙氨酸5mg/L、脯氨酸10mg/L、絲氨酸10mg/L、蘇氨酸10mg/L、色氨酸5mg/L、酪氨酸10mg/L、纈氨酸10mg/L、羥基脯氨酸5mg/L、高半胱氨酸2mg/L和牛磺酸5mg/L。

本發(fā)明中，優(yōu)選的方案為所述DMEM、酶解明膠溶液、氨基酸DMEM溶液和胎牛血清的體積比為：酶解明膠溶液：氨基酸DMEM溶液：胎牛血清：DMEM＝1:2:2-5:100；