[發明專利]一種提高鴨黃病毒病毒滴度的培養方法

有效

• 申請號: 201510050831.4
• 申請日: 2015-01-31
• 公開（公告）號: CN104560892B
• 公開（公告）日: 2017-01-18
• 發明（設計）人: 馮曉聲;王貴平;賈愛卿;王偉
• 申請（專利權）人: 廣東海大畜牧獸醫研究院有限公司;四川海林格生物制藥有限公司
• 主分類號: C12N7/00
• 分類號: C12N7/00;C12R1/93
• 代理公司: 廣州市越秀區哲力專利商標事務所(普通合伙)44288
• 代理人: 羅偉添

1.一種提高鴨黃病毒病毒滴度的培養方法，其特征在于：其包括以下步驟：

A、DMEM培養液的配制：將DMEM干粉溶于去離子水中，攪拌至完全溶解后，調節pH值至6.8～7.8，并用≤0.22μm的無菌濾膜進行除菌過濾，置于≤4℃的冰箱待用；

B、往上述的DMEM溶液中加入占DMEM培養液體積1％～8％的胎牛血清后，接種細胞進行單層培養；

C、待單層細胞培養好后，棄去培養容器內的DMEM培養液，并用無菌洗液洗；

D、棄去無菌洗液，然后往培養容器內加入親和劑和步驟A所述的DMEM培養液，其中親和劑的體積用量為DMEM培養液體積用量的0.01％～1％；

E、將培養容器置于細胞培養箱中靜置培養1min～30min后，接種鴨黃病毒，混合均勻后置于細胞培養箱中培養2～5天，收獲病毒液。

2.根據權利要求1所述的培養方法，其特征在于：步驟B中所述的細胞為Vero細胞、293細胞、ST細胞、BHK細胞中的一種。

3.根據權利要求1所述的培養方法，其特征在于：步驟C中所述的無菌洗液為去離子水、PBS緩沖液、無血清DMEM培養液中的一種。

4.根據權利要求1所述的培養方法，其特征在于：步驟D中所述的親和劑由以下按質量百分數計的各組分制備而成：

5.根據權利要求4所述的培養方法，其特征在于：步驟D中所述的親和劑由以下按質量百分數計的各組分制備而成：

6.根據權利要求4所述的培養方法，其特征在于：步驟D中所述的親和劑由以下按質量百分數計的各組分制備而成：

7.根據權利要求4所述的培養方法，其特征在于：所述無機鹽為硫酸鈉、磷酸氫二鈉、氯化鉀、氯化鈉中的一種或兩種以上。

8.根據權利要求7所述的培養方法，其特征在于：所述的硫酸鈉占親和劑總量的0.15～0.3％；所述的磷酸二氫鈉占親和劑總量的0.1-1.6％；所述的氯化鈉占親和劑總量的0.09-0.9％；所述的氯化鉀占親和劑總量的0.01-1％。

9.根據權利要求4～6中任一項所述的培養方法，其特征在于：所述的親和劑是按以下步驟制備而成的：按配方量稱取丙二酸、磷酸、山梨酸、蘋果酸、無機鹽，將上述組分溶于配方量的去離子水中，過濾即得。