[發明專利]泰山紫草萘醌活性單體制備工藝

無效

• 申請號: 201510048442.8
• 申請日: 2015-01-30
• 公開（公告）號: CN104774151A
• 公開（公告）日: 2015-07-15
• 發明（設計）人: 馮蕾;冀海偉;蔣漢明;翟靜;衣淑瑩;姜紅霞
• 申請（專利權）人: 泰山醫學院
• 主分類號: C07C69/18
• 分類號: C07C69/18;C07C67/48;C07C67/56;C07C67/58;C07C69/675;C07C69/30;A61P35/00
• 代理公司: 泰安市泰昌專利事務所 37207
• 代理人: 姚德昌

技術領域

本發明涉及醌類色素分離純化領域，具體為一種泰山紫草萘醌活性單體制備工藝。?

背景技術

據藥典記載，入藥的紫草為紫草科植物紫草、新疆假紫草或滇紫草的根。其中新疆紫草和滇紫草為一年生草本植物，稱為軟紫草。泰山所產紫草主要在泰山山脈海拔200-600米之間的區域生存，為多年生木本，稱為硬紫草。兩種紫草都可以入藥，所含主要活性成分主要是具有5,8-二羥基萘醌結構的萘醌色素。泰山紫草為泰山的四大名藥之一，因其獨特的地理環境和氣候條件，產量極少，而且，我們購買的商品單體在進行藥理活性實驗時，效果非常不理想。

目前，紫草的提取分離方法主要是利用各種有機試劑，加以物理方法例如微波和超聲波提取。單體的分離主要采用傳統的硅膠柱層析或者制備液相色譜技術分離得到。傳統的分離方法耗時費力，一次實驗等到的單體種類少而量小，由于紫草中的萘醌色素對光，對熱都敏感。所以普通的提取分離方法在提取過程中就會對活性成分造成一定的破壞。市面上商品單體售價達到每毫克幾百元，不能滿足藥理研究及質量控制的需要；而且市面上購買的軟紫草來源的單體在誘導ROS活性氧導致的DNA損傷，從而導致癌細胞凋亡方面效果并不顯著。

發明內容

本發明針對以上不足之處，提供了一種泰山紫草萘醌活性單體制備工藝，利用本工藝生產的泰山紫草來源的單體相比軟紫草來源的單體，具備更好的抗癌活性，可以為進一步開發泰山珍稀紫草資源提供研究資料。

本發明解決其技術問題所采用的技術方案是：一種泰山紫草萘醌活性單體制備工藝，包含有如下步驟：

（1）泰山紫草原料處理

將泰山紫草放在低溫環境下進行干燥48小時，溫度設置為35°C，干燥完畢后將泰山紫草粉碎至60目；

（2）超臨界萃取工藝

將得到的泰山紫草干燥粉末使用超臨界萃取裝置進行萃取，使用超臨界二氧化碳為萃取劑，在壓力為40?MPa?、溫度為45°C、萃取劑流速為35?L?h-1的條件下進行萃取，在壓力為6MPa?、溫度為30°C的條件下進行分離，得到深紫色油狀萃取物；

（3）將上一步中得到的深紫色油狀萃取物使用高速逆流色譜儀進行分離純化，逆流色譜的溶劑體系是石油醚-乙酸乙酯-乙醇-水，比例為(5:5:6:4,?v/v)，形成互不相溶的上下兩相，以上相作為固定相，固定相的保留率為55%，將2.35g超臨界流體萃取樣溶解于5ml等量的上相與下相，進行進樣，分離過程中，流速為2ml/min，轉速為850rpm，檢測波長254nm.?根據逆流色譜圖譜，收集所需組分；得高純度活性單體I??β-羥基異戊酰基紫草素；II?乙酰紫草素；III??異丁酰紫草素。

本發明從泰山紫草制備的單體比市面上購買的軟紫草來源的單體在誘導ROS活性氧導致的DNA損傷，從而導致癌細胞凋亡方面具有更好的效果；

本研究選取泰山紫草為原料，利用超臨界萃取和高速逆流色譜為主要工藝設備，獨創了一條簡單，高效的制備泰山紫草中三種主要活性單體的工藝流程，并利用制備的單體對前列腺癌進行了一系列的氧化應激反應；

超臨界二氧化碳流體萃取技術是在接近于室溫的條件下進行，無溶劑殘留，特別適合萘醌這類熱敏物質的分離；

而高速逆流色譜（High?speed?counter-current?chromatography,?HSCCC）是一種新型的分離技術，該技術不采用固態吸附劑，與其它的色譜技術相比，HSCCC能夠消除固體吸附劑所導致的樣品不可逆吸附和對樣品的沾染、失活、變性等影響，實現復雜混合物中各組分的高純度分離。而且，由于其沒有固體吸附柱，可以提高進樣量，能夠達到一定的制備級別；

利用本工藝生產的泰山紫草來源的單體相比軟紫草來源的單體，具備更好的抗癌活性，可以為進一步開發泰山珍稀紫草資源提供研究資料；

可以為泰山紫草的質量控制和藥理研究快速、高效的提供高純度，無任何溶劑殘留的活性單體。

附圖說明

圖1所示為乙酰紫草素抑制PC3和DU145細胞增殖的時間、劑量關系圖；

圖2所示為顯微鏡拍攝的乙酰紫草素對兩種前列腺癌細胞的IC50的作用圖；

圖3所示為高速逆流色譜分離泰山紫草萘醌活性單體時的?HSCCC?色譜圖；

圖4所示為逆流色譜得到的組分單體I的氫譜；

圖5所示為逆流色譜得到的組分單體I的碳譜；

圖6所示為逆流色譜得到的組分單體II的氫譜；

圖7所示為逆流色譜得到的組分單體II的碳譜；