[發(fā)明專利]一種構(gòu)建細(xì)菌的酵母雙雜交cDNA文庫的方法在審
| 申請?zhí)枺?/td> | 201510046952.1 | 申請日： | 2015-01-29 |
| 公開（公告）號： | CN104651390A | 公開（公告）日： | 2015-05-27 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 張嘉;朱春節(jié);許玫英;孫國萍;郭俊 | 申請（專利權(quán)）人： | 廣東省微生物研究所 |
| 主分類號： | C12N15/81 | 分類號： | C12N15/81;C12N15/10;C40B50/06 |
| 代理公司： | 廣州科粵專利商標(biāo)代理有限公司 44001 | 代理人： | 劉明星 |
| 地址： | 510070 *** | 國省代碼： | 廣東;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 構(gòu)建 細(xì)菌 酵母 雙雜交 cdna 文庫 方法 | ||
【權(quán)利要求書】：
1.一種酵母雙雜交cDNA文庫的方法，其特征在于，包括以下步驟：提取細(xì)菌總RNA，再去除總RNA中的5s?rRNA、tRNA及小分子RNA，再對mRNA進(jìn)行富集，使用隨機六聚體作為引物對富集的mRNA進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄PCR合成單鏈的cDNA，再通過LD-PCR以單鏈的cDNA為模板擴(kuò)增獲得雙鏈cDNA，再利用同源重組將全長雙鏈cDNA與文庫載體共同轉(zhuǎn)化靶蛋白酵母菌株，獲得細(xì)菌的cDNA文庫。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述的去除總RNA中的5s?rRNA、tRNA及小分子RNA是利用試劑盒MEGAclearTMKit去除的。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述的對mRNA進(jìn)行富集是利用試劑盒MICROB?ExpressTM?Bacterial?mRNA?Enrichment?Kit(Ambion)對mRNA進(jìn)行富集。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述的酵母菌株是酵母菌株AH109。
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