[發明專利]一種負載細胞三維支架的制備方法及應用

有效

• 申請號: 201510045823.0
• 申請日: 2015-01-29
• 公開（公告）號: CN104548208B
• 公開（公告）日: 2016-10-26
• 發明（設計）人: 王紅;張楠
• 申請（專利權）人: 青島尤尼科技有限公司
• 主分類號: C12N5/071
• 分類號: C12N5/071;A61L27/38;A61L27/24;A61L27/22;A61L27/20
• 代理公司: 青島聯智專利商標事務所有限公司 37101
• 代理人: 崔濱生

1.一種負載細胞三維支架的制備方法，其特征在于，是將自體細胞與高溫間歇滅菌的水凝膠溶液混合均勻得到混合液，噴射到交聯劑溶液中，靜置，然后去除交聯劑溶液，漂洗后得到負載細胞微球體；將負載細胞微球體與基質材料混合得到細胞共混物；采用生物打印機將細胞共混物擠出在三維微動平臺上，層層疊加，形成負載細胞三維支架。

2.根據權利要求1所述的一種負載細胞三維支架的制備方法，其特征在于，所述水凝膠溶液為水凝膠單體和水凝膠溶劑混合均勻配制而成，濃度為0.05-10 wt%；所述水凝膠單體為膠原、明膠、透明質酸、殼聚糖或海藻酸納中的一種或幾種的混合物；所述水凝膠溶劑為水或pH值為5.7-8.0的磷酸鹽緩沖溶液。

3.根據權利要求1所述的一種負載細胞三維支架的制備方法，其特征在于，所述混合液中自體細胞的濃度為10⁵-10⁷/mL。

4.根據權利要求1所述的一種負載細胞三維支架的制備方法，其特征在于，所述噴射的壓力為10-200 kPa，噴頭直徑為500-1000 μm。

5.根據權利要求1所述的一種負載細胞三維支架的制備方法，其特征在于，所述交聯劑溶液為CaCl₂溶液，濃度為0.1-20 wt%。

6.根據權利要求1所述的一種負載細胞三維支架的制備方法，其特征在于，所述的自體細胞為骨髓間充質干細胞、脂肪干細胞、軟骨細胞、成骨細胞中的一種或幾種組合。

7.根據權利要求1所述的一種負載細胞三維支架的制備方法，其特征在于，所述漂洗是先用PBS溶液漂洗3遍，然后使用DMEM培養液漂洗3遍。

8.根據權利要求1所述的一種負載細胞三維支架的制備方法，其特征在于，所述基質材料的制備方法為：分別配制重組膠原溶液和海藻酸鈉溶液，按質量比1:1-5混合，高溫間歇滅菌，所述重組膠原溶液的濃度為2-10 wt %，所述海藻酸鈉溶液的濃度為2-10 wt %；配置濃度為0.05- 2 wt %的CaCl₂溶液，將重組膠原-海藻酸鈉混合液與CaCl₂溶液按體積比7:3混合均勻，得到基質材料。

9.根據權利要求1所述的一種負載細胞三維支架的制備方法，其特征在于，所述細胞共混物中負載細胞微球體的濃度為10⁵-10⁷/mL。

10.根據權利要求1的方法制備得到的負載細胞三維支架用于制備組織工程支架。